| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-13页 |
| 第二章 材料和方法 | 第13-35页 |
| ·实验材料 | 第13-18页 |
| ·细胞株、质粒来源 | 第13页 |
| ·主要试剂产地 | 第13-14页 |
| ·自配试剂 | 第14-17页 |
| ·主要仪器设备和产地 | 第17-18页 |
| ·实验方法 | 第18-35页 |
| ·MCF-7 细胞的培养 | 第18-20页 |
| ·RT-PCR 方法克隆 BRMS 1 cDNA 全长编码序列 | 第20-23页 |
| ·MCF-7 细胞总RNA 的提取 | 第20页 |
| ·提取的总RNA 质量、浓度检测与标化 | 第20-21页 |
| ·cDNA 的合成即RNA 的逆转录反应(RT) | 第21页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第21-23页 |
| ·质粒pcDNA3.1/myc-His(-)B 的扩增 | 第23-26页 |
| ·质粒pcDNA3.1/myc-His(-)B 图谱 | 第23-24页 |
| ·感受态细胞DH5α的制备 | 第24页 |
| ·质粒pcDNA3.1/myc-His(-)B 的转化与扩增 | 第24-25页 |
| ·pcDNA3.1/myc-His(-)B 质粒的提取纯化 | 第25-26页 |
| ·基因重组技术 | 第26-31页 |
| ·限制性内切酶酶切质粒pcDNA3.1/myc-His(-)B 和BRMS 1 cDNA | 第26-27页 |
| ·T4 DNA 连接酶连接反应 | 第27-28页 |
| ·重组体pcDNA3.1(-)B /myc- BRMS 1 的转化与提取 | 第28-30页 |
| ·重组体pcDNA3.1(-)B /myc-BRMS 1 的鉴定 | 第30-31页 |
| ·pcDNA3.1(-)B /myc –BRMS 1 分组瞬时转染 HEK-293 细胞 | 第31-32页 |
| ·核酸定量分析仪测质粒DNA 浓度 | 第31页 |
| ·pcDNA3.1/myc-his(-)B 和 pcDNA3.1(-)B/myc-BRMS 1瞬时转染人胚肾母细胞HEK-293 | 第31-32页 |
| ·免疫印迹检测BRMS 1 蛋白表达 | 第32-35页 |
| ·试剂准备 | 第32页 |
| ·操作步骤 | 第32-35页 |
| 第三章 结果 | 第35-41页 |
| ·总 RNA 提取样品的纯度与质量 | 第35页 |
| ·RT-PCR 扩增 BRM51 基因 | 第35-36页 |
| ·检测 BRM51 基因的存在 | 第35页 |
| ·BRM51 基因全长cDNA 扩增 | 第35-36页 |
| ·质粒pcDNA3.1/myc-His(-)B 转化后提取纯化结果 | 第36-37页 |
| ·质粒pcDNA3.1/myc-His(-)B 的浓度测定 | 第36页 |
| ·提取的质粒pcDNA3.1/myc-His(-)B 的鉴定 | 第36-37页 |
| ·双酶切后质粒pcDNA3.1/myc-His(-)B BRMS1 cDNA 片段纯化结果 | 第37页 |
| ·重组体pcDNA3.1(-)B /myc-BRM51 的鉴定 | 第37-41页 |
| ·限制性内切酶酶切分析 | 第37-38页 |
| ·全自动 DNA 测序分析 | 第38-40页 |
| ·BRM51 蛋白表达的免疫印迹检测 | 第40-41页 |
| 第四章 讨论 | 第41-48页 |
| 第五章 结论与展望 | 第48-50页 |
| ·结论 | 第48页 |
| ·进一步的研究方向 | 第48-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 文献综述 | 第55-62页 |
| 附录 A BCBI 基因库[AF159141]公布的序列 | 第62-63页 |
| 附录 B pcDNA3.1/myc-his(-)B 质粒的多克隆位点 | 第63-64页 |
| 附录 C BRMS 1 基因图谱 | 第64-65页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第65页 |
