| 中文摘要 | 第1-16页 |
| 英文摘要 | 第16-19页 |
| 第一章、绪论 | 第19-61页 |
| 第一节、冬凌草甲素的研究进展 | 第19-25页 |
| 一、冬凌草甲素的结构性质 | 第20页 |
| 二、冬凌草甲素的生理和药理作用 | 第20-25页 |
| 1.冬凌草甲素的抗肿瘤作用 | 第20-23页 |
| ·抗细胞增殖作用 | 第20-22页 |
| ·抑制癌细胞DNA、RNA和蛋白质的合成 | 第22页 |
| ·诱导细胞凋亡 | 第22-23页 |
| ·抗突变作用 | 第23页 |
| 2.对机体免疫功能的影响 | 第23-24页 |
| 3.对β-受体的阻断作用 | 第24页 |
| 4.临床应用 | 第24-25页 |
| ·治疗原发性肝癌 | 第24页 |
| ·治疗食管癌、贲门癌 | 第24-25页 |
| 第二节、细胞凋亡及其分子机制的研究进展 | 第25-37页 |
| 一、细胞凋亡的概念与形态学改变 | 第25-26页 |
| 二、细胞凋亡的基因调控及信号转导途径 | 第26-36页 |
| 1.Caspase蛋白酶与细胞凋亡 | 第26-28页 |
| 2.Bcl-2家族成员在凋亡中的作用 | 第28-29页 |
| 3.MAPKs与细胞凋亡的关系 | 第29-31页 |
| 4.p53基因的功能 | 第31-34页 |
| ·p53基因对细胞周期的调控 | 第32页 |
| ·p53基因对细胞凋亡的调控 | 第32-34页 |
| 5.线粒体介导的凋亡途径及调控机制 | 第34-36页 |
| 三、细胞凋亡与肿瘤的关系 | 第36-37页 |
| 1.凋亡与肿瘤的发生 | 第36页 |
| 2.抗肿瘤治疗中诱导肿瘤凋亡 | 第36-37页 |
| 第三节、细胞自噬及其分子机制的研究进展 | 第37-48页 |
| 一、自噬的分类与自噬体形成的分子基础 | 第37-41页 |
| 1.自噬的分类 | 第37-38页 |
| 2.自噬体的发生过程 | 第38-41页 |
| ·自噬的诱导 | 第38-39页 |
| ·自噬体的形成 | 第39-40页 |
| ·自噬体的运输、融合 | 第40-41页 |
| ·自噬体内再循环利用 | 第41页 |
| 二、自噬的信号调控 | 第41-44页 |
| 1.mTOR对自噬的负调控作用 | 第41页 |
| 2.PI3K对自噬通路的调控 | 第41-42页 |
| 3.MAPKs信号通路对自噬的影响 | 第42-43页 |
| 4.MAP-LC3在自噬中的功能 | 第43-44页 |
| 三、自噬与肿瘤 | 第44-45页 |
| 1.自噬与细胞周期 | 第45页 |
| 2.自噬与肿瘤进程 | 第45页 |
| 3.自噬与血管生成 | 第45页 |
| 四、自噬与凋亡 | 第45-48页 |
| 1.自噬与凋亡相关因子 | 第46页 |
| 2.自噬与凋亡相互促进 | 第46-47页 |
| 3.自噬与凋亡相互拮抗 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-61页 |
| 第二章、冬凌草甲素诱导人宫颈癌HeLa细胞自噬拮抗凋亡的机制的研究 | 第61-88页 |
| 前言 | 第61-63页 |
| 一、实验材料与方法 | 第63-69页 |
| 1、实验材料 | 第63-64页 |
| ·细胞 | 第63页 |
| ·药品与试剂 | 第63-64页 |
| ·仪器 | 第64页 |
| 2.实验方法 | 第64-69页 |
| ·细胞培养 | 第64页 |
| ·MTT法测定冬凌草甲素对HeLa细胞的生长抑制作用 | 第64-65页 |
| ·观察细胞形态学变化 | 第65页 |
| ·流式细胞分析确定自噬比率、细胞周期分布和3-MA的作用效果 | 第65页 |
| ·PI3K、Ras、Raf-1、ERK1/2、P38和JNK的抑制剂对自噬的影响 | 第65-66页 |
| ·细胞DNA提取及电泳 | 第66页 |
| ·Western Blot免疫印迹法 | 第66-69页 |
| ·工作液的配制 | 第66-67页 |
| ·蛋白质电泳 | 第67-68页 |
| ·免疫印迹 | 第68-69页 |
| ·统计分析 | 第69页 |
| 二、实验结果 | 第69-82页 |
| 1.冬凌草甲素对HeLa细胞具有细胞毒作用 | 第69-70页 |
| 2.冬凌草甲素诱导HeLa细胞发生凋亡 | 第70-71页 |
| 3.冬凌草甲素诱导HeLa细胞发生DNA片段化 | 第71-72页 |
| 4.冬凌草甲素能够诱导HeLa细胞发生自噬 | 第72页 |
| 5.MDC募集到冬凌草甲素作用的HeLa细胞中 | 第72-73页 |
| ·-MA抑制冬凌草甲素诱导的自噬作用 | 第73-75页 |
| 7.抑制自噬可以上调凌草甲素诱导的细胞凋亡 | 第75-76页 |
| 8.PI3K促进自噬但抑制凋亡 | 第76-77页 |
| 9.p-Akt蛋白表达在凋亡中下调,但在自噬中上调 | 第77-78页 |
| ·-MA加强了Bax/Bcl-2比例的上调以及SIRT-1表达的下调 | 第78-79页 |
| 11.Ras、p38和JNK参与了自噬途径 | 第79-81页 |
| 12.p38和JNK促进自噬途径,但ERK1/2不参与该途径 | 第81页 |
| ·-MA、Ras、p38和JNK影响MAP-LC3和Beclin-1的表达 | 第81-82页 |
| 三、讨论 | 第82-83页 |
| 四、小结 | 第83页 |
| 参考文献 | 第83-88页 |
| 第三章、冬凌草甲素诱导人乳腺癌MCF-7细胞自噬促进凋亡的机制的研究 | 第88-114页 |
| 前言 | 第88-90页 |
| 一、实验材料与方法 | 第90-95页 |
| 1、实验材料 | 第90-92页 |
| ·细胞 | 第90-91页 |
| ·药品与试剂 | 第91页 |
| ·仪器 | 第91-92页 |
| 2.实验方法 | 第92-95页 |
| ·细胞培养 | 第92页 |
| ·MTT法测定冬凌草甲素对MCF-7细胞的生长抑制作用 | 第92页 |
| ·观察细胞形态学变化 | 第92-93页 |
| ·乳酸脱氢酶活力测定 | 第93页 |
| ·细胞DNA提取及电泳 | 第93页 |
| ·测定细胞膜电位变化 | 第93-94页 |
| ·流式细胞分析确定自噬率和细胞周期分布 | 第94页 |
| ·Western blot免疫印迹法 | 第94页 |
| ·统计分析 | 第94-95页 |
| 二、实验结果 | 第95-109页 |
| 1.冬凌草甲素对MCF-7细胞的细胞毒性 | 第95页 |
| 2.冬凌草甲素诱导MCF-7的死亡方式以凋亡为主 | 第95-98页 |
| 3.冬凌草甲素破坏了细胞线粒体的完整性 | 第98-99页 |
| 4.冬凌草甲素诱导MCF-7细胞发生S期阻滞并上调p53和p21蛋白表达 | 第99-100页 |
| 5.Caspases和calpain都促进冬凌草甲素诱导的MCF-7细胞死亡 | 第100-101页 |
| 6.冬凌草甲素对Bax、Bcl-2、Caspase-9和Hsp 90蛋白表达的影响 | 第101-102页 |
| 7.冬凌草甲素对Caspase-3、PARP和ICAD蛋白表达的影响 | 第102-103页 |
| 8.冬凌草甲素和3-MA作用引起MCF-7细胞发生形态学改变 | 第103-105页 |
| 9.冬凌草甲素诱导MCF-7细胞发生自噬 | 第105-106页 |
| 10.冬凌草甲素和3-MA对MCF-7细胞的周期分布、凋亡及自噬的影响 | 第106-107页 |
| 11.MAPKs参与调控冬凌草甲素诱导的MCF-7细胞凋亡和自噬 | 第107-109页 |
| 三、讨论 | 第109-110页 |
| 四、小结 | 第110页 |
| 参考文献 | 第110-114页 |
| 第四章、冬凌草甲素诱导人表皮癌A431细胞自亡的机制的研究 | 第114-128页 |
| 前言 | 第114-115页 |
| 一、实验材料与方法 | 第115-118页 |
| 1、实验材料 | 第115-116页 |
| ·细胞 | 第115页 |
| ·药品与试剂 | 第115页 |
| ·仪器 | 第115-116页 |
| 2.实验方法 | 第116-118页 |
| ·细胞培养 | 第116页 |
| ·细胞形态学观察 | 第116页 |
| ·LDH实验 | 第116-117页 |
| ·流式细胞分析自噬和细胞周期分布 | 第117页 |
| ·酪氨酸激酶活力测定 | 第117-118页 |
| ·细胞裂解液配制 | 第117页 |
| ·细胞提取物的制备 | 第117页 |
| ·酪氨酸激酶活力测定 | 第117-118页 |
| ·Western Blot免疫印迹分析 | 第118页 |
| ·统计分析 | 第118页 |
| 二、实验结果 | 第118-124页 |
| 1.冬凌草甲素诱导A431细胞凋亡 | 第118-119页 |
| ·-MA促进凋亡抑制自噬并诱导细胞周期阻滞 | 第119-122页 |
| 3.自噬不影响冬凌草甲素引起的总酪氨酸激酶活力抑制 | 第122-124页 |
| 4.Caspase-3和CaSpase-9促进凋亡抑制自噬 | 第124页 |
| 三、讨论 | 第124-125页 |
| 四、小结 | 第125页 |
| 参考文献 | 第125-128页 |
| 致谢 | 第128-129页 |
| 缩略语说明 | 第129-134页 |
| 发表文章 | 第134-148页 |
