| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 1 引言 | 第10-20页 |
| ·研究背景 | 第10-11页 |
| ·Β-甘露聚糖酶简介及国内外研究进展 | 第11-15页 |
| ·Β-甘露聚糖酶简介 | 第11页 |
| ·国内外的研究进展 | 第11-13页 |
| ·Β-甘露聚糖酶的应用研究 | 第13-15页 |
| ·酵母表达系统简介 | 第15-19页 |
| ·毕赤酵母表达系统的特点 | 第15-16页 |
| ·表达载体的重要元件 | 第16-17页 |
| ·宿主菌株 | 第17-18页 |
| ·目的基因整合到酵母基因组 | 第18-19页 |
| ·实验的研究基础、研究目的及主要内容 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-33页 |
| ·材料 | 第20-22页 |
| ·菌株 | 第20页 |
| ·质粒 | 第20页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第20页 |
| ·常用溶液及缓冲液 | 第20-21页 |
| ·培养基 | 第21页 |
| ·仪器 | 第21-22页 |
| ·方法 | 第22-33页 |
| ·实验方法流程图 | 第22页 |
| ·酵母基因组的提取 | 第22-23页 |
| ·引物设计 | 第23页 |
| ·PCR 扩增 | 第23-24页 |
| ·质粒的小量提取 | 第24页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第24-25页 |
| ·DNA 酶切 | 第25-27页 |
| ·DNA 的回收 | 第27-28页 |
| ·连接与转化 | 第28-29页 |
| ·整合组成型表达载体PGAP-RDNA-MANⅠ的构建 | 第29-30页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第30-31页 |
| ·阳性重组质粒导入野生酵母菌 | 第31-32页 |
| ·G418 抗生素对野生酵母整合菌株的筛选 | 第32页 |
| ·PCR 鉴定目的基因的整合 | 第32页 |
| ·重组野生酵母的培养、表达及活性测定 | 第32-33页 |
| 3 实验结果 | 第33-39页 |
| ·酵母基因组 DNA 的电泳结果与分析 | 第33-34页 |
| ·P_(GAP)和25S RDNA PCR 扩增结果 | 第34页 |
| ·PPIC9K 质粒提取的琼脂糖凝胶电泳结果与分析 | 第34-35页 |
| ·构建的组成型载体 PGAP 的鉴定结果与分析 | 第35页 |
| ·构建的整合组成型载体PGAP-RDNA 的鉴定结果与分析 | 第35-36页 |
| ·构建的整合组成型表达载体 PGAP-RDNA-MANⅠ的鉴定结果与分析 | 第36-38页 |
| ·MANⅠ的亚克隆结果与分析 | 第36-37页 |
| ·整合组成型表达载体 PGAP-RDNA-MANⅠ的鉴定结果与分析 | 第37-38页 |
| ·Β-甘露聚糖酶基因在野生型酵母菌中的组成型表达结果与分析 | 第38-39页 |
| ·G418 抗生素对野生酵母整合菌株的筛选 | 第38页 |
| ·PCR 鉴定目的基因的整合 | 第38-39页 |
| ·重组酵母表达产物的测定 | 第39页 |
| 4 讨论 | 第39-41页 |
| ·整合组成型酵母表达载体的构建策略 | 第39-40页 |
| ·电转化酵母及外源基因表达的讨论 | 第40-41页 |
| 5 结论 | 第41-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-52页 |
| 附录 | 第52-58页 |
| 作者简介 | 第58页 |
