| 摘要 | 第1-12页 |
| 缩略词 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-18页 |
| 引言 | 第18-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-36页 |
| 前言 | 第19页 |
| 第一节 植物次生代谢产物与次生代谢工程 | 第19-23页 |
| 第二节 茉莉酸类物质的生物合成途径及生物学意义 | 第23-34页 |
| ·a-亚麻酸的释放 | 第25页 |
| ·脂氧合酶(Lipoxygenase,LOX)及LOX代谢途径 | 第25-27页 |
| ·丙二烯氧化物合成酶(AOS)及其所属的酶家族 | 第27-30页 |
| ·丙二烯氧化物环化酶(AOC)及其作用 | 第30-31页 |
| ·OPDA还原酶 | 第31-32页 |
| ·β-氧化酶 | 第32页 |
| ·茉莉酸的甲基化酶 | 第32页 |
| ·JA合成的调控特征 | 第32-33页 |
| ·茉莉酸途径各个产物的生理意义 | 第33页 |
| ·展望 | 第33-34页 |
| 第三节 茉莉酸类物质对次生代谢的作用,以及其合成途径基因的遗传操作在次生代谢工程中应用的可行性 | 第34-36页 |
| 第二章 莨菪茉莉酸生物合成途径AOC基因的克隆与分析 | 第36-80页 |
| 引言 | 第36页 |
| 第一节 实验材料 | 第36-40页 |
| ·植物材料 | 第36页 |
| ·菌株和载体 | 第36页 |
| ·仪器和设备 | 第36-37页 |
| ·试剂盒及购买的试剂 | 第37-38页 |
| ·自配的主要标准试剂 | 第38-40页 |
| ·自配的其它试剂 | 第40页 |
| 第二节 实验方法与步骤 | 第40-59页 |
| ·莨菪材料的准备 | 第40页 |
| ·莨菪植株叶片的诱导处理 | 第40页 |
| ·诱导处理莨菪叶片总RNA的抽提与质量检测 | 第40-41页 |
| ·莨菪叶片基因组DNA的提取 | 第41-42页 |
| ·从莨菪总RNA合成第一链3'-cDNA | 第42-43页 |
| ·HnAOC基因3'-cDNA片段的获得 | 第43-44页 |
| ·莨菪RACE-Ready5'-cDNA的合成 | 第44-45页 |
| ·HnAOC的5'-RACE | 第45-46页 |
| ·HnAOC全长cDNA的克隆 | 第46-47页 |
| ·HnAOC基因组全长的克隆 | 第47-48页 |
| ·HnAOC的Southern blot分析 | 第48-52页 |
| ·HnAOC基因表达分析 | 第52-54页 |
| ·本章涉及的DNA片段的回收、连接、克隆和测序 | 第54-57页 |
| ·生物信息学分析 | 第57页 |
| ·HnAOC的原核表达 | 第57-59页 |
| 第三节 结果与讨论 | 第59-76页 |
| ·HnAOC cDNA的全长克隆和性质分析 | 第59页 |
| ·HnAOC基因组序列 | 第59-61页 |
| ·HnAOC推导的蛋白质序列的性质分析 | 第61-66页 |
| ·HnAOC蛋白的分子进化分析 | 第66页 |
| ·HnAOC蛋白的二级结构 | 第66-69页 |
| ·HnAOC蛋白的三级结构预测 | 第69页 |
| ·HnAOC蛋白的叶绿体前导肽预测 | 第69页 |
| ·HnAOC的Southern杂交结果 | 第69页 |
| ·HnAOC基因的诱导表达分析 | 第69-76页 |
| ·HnAOC蛋白的原核表达 | 第76页 |
| 第四节 小结与讨论 | 第76-80页 |
| 第三章 莨菪茉莉酸生物合成途径AOS基因的克隆与分析 | 第80-106页 |
| 引言 | 第80页 |
| 第一节 实验材料 | 第80页 |
| 第二节 实验方法与步骤 | 第80-89页 |
| ·莨菪材料的准备 | 第80页 |
| ·莨菪植株叶片的诱导处理 | 第80页 |
| ·诱导处理莨菪叶片总RNA的抽提、检测与浓度测定 | 第80-81页 |
| ·莨菪叶片基因组DNA的提取 | 第81页 |
| ·从莨菪总RNA合成第一链3'-cDNA | 第81页 |
| ·HnAOS基因核心片段的获得 | 第81页 |
| ·莨菪RACE-Ready 5'-cDNA的合成 | 第81-82页 |
| ·HnAOS基因的5'RACE- | 第82-83页 |
| ·HnAOS全长cDNA的克隆 | 第83-84页 |
| ·HnAOS基因组全长的克隆 | 第84-85页 |
| ·HnAOS的Southern blot分析 | 第85-86页 |
| ·HnAOS基因表达分析 | 第86-89页 |
| ·本章涉及的DNA片段的回收、连接、克隆和测序 | 第89页 |
| ·生物信息学分析 | 第89页 |
| 第三节 结果与讨论 | 第89-105页 |
| ·HnAOS cDNA的全长克隆和性质分析 | 第89-90页 |
| ·HnAOS推导的蛋白质序列的性质分析 | 第90页 |
| ·HnAOS的分子进化分析 | 第90-100页 |
| ·HnAOS蛋白的二级结构分析 | 第100-101页 |
| ·HnAOS蛋白的三级结构预测 | 第101-102页 |
| ·HnAOS蛋白的叶绿体前导肽预测 | 第102页 |
| ·HnAOS的Southern杂交结果 | 第102-103页 |
| ·HnAOS基因的组织特异性表达分析 | 第103页 |
| ·HnAOS基因的诱导表达分析 | 第103-105页 |
| 第四节 小结与讨论 | 第105-106页 |
| 第四章 应用HnAOC基因进行烟草中尼古丁的代谢工程 | 第106-127页 |
| 引言 | 第106页 |
| 第一节 实验材料与试剂 | 第106页 |
| 第二节 试验方法与步骤 | 第106-117页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA1304+HnAOC的构建 | 第106-109页 |
| ·表达载体转化到根癌农杆菌EHA105 | 第109页 |
| ·叶盘法转化烟草 | 第109-110页 |
| ·转基因烟草PCR检测 | 第110-111页 |
| ·转基因烟草的Southern blot分析 | 第111-112页 |
| ·转基因烟草中HnAOC与NtAOC的RT-PCR检测 | 第112-113页 |
| ·转基因烟草在低温处理后叶片电导率的测定 | 第113页 |
| ·转基因烟草中尼古丁合成途径两个关键酶基因的表达水平RT-QPCR测定 | 第113-114页 |
| ·烟草的甲基茉莉酸处理 | 第114页 |
| ·尼古丁含量的测定 | 第114-116页 |
| ·莨菪发根的转化 | 第116-117页 |
| 第三节 结果和讨论 | 第117-126页 |
| ·转基因烟草的获得 | 第117-118页 |
| ·转基因烟草的分子检测 | 第118-119页 |
| ·转基因烟草的Southern杂交检测 | 第119-120页 |
| ·转基因烟草中NtAOC与HnAOC表达的RT-PCR分析 | 第120-121页 |
| ·转基因烟草对低温处理的耐受性 | 第121-122页 |
| ·转基因烟草中尼古丁合成途径两个关键酶的表达水平 | 第122-123页 |
| ·转基因烟草中的尼古丁含量以及甲基茉莉酸处理对尼古丁含量的影响 | 第123-125页 |
| ·转基因莨菪发根的获得 | 第125-126页 |
| 第四节 小结 | 第126-127页 |
| 第五章 金银花茉莉酸合成途径AOS基因的克隆与分析 | 第127-150页 |
| 引言 | 第127-128页 |
| 第一节 实验材料与试剂 | 第128页 |
| 第二节 实验方法与步骤 | 第128-135页 |
| ·植物材料 | 第128页 |
| ·金银花叶片总RNA的抽提及RNA质量检测 | 第128页 |
| ·从金银花总RNA合成第一链3'-cDNA- | 第128页 |
| ·LjAOS基因核心片段的获得 | 第128-129页 |
| ·LjAOS基因3'-端序列的扩增 | 第129-130页 |
| ·金银花RACE-Ready-5'-cDNA的合成 | 第130页 |
| ·LjAOS基因的5'-RACE | 第130-131页 |
| ·LjAOS全长cDNA的克隆 | 第131-132页 |
| ·LjAOS基因组全长的克隆 | 第132-133页 |
| ·LjAOS的Southern blot分析 | 第133-134页 |
| ·LiAOS基因组织表达分析 | 第134-135页 |
| ·本章涉及的DNA片段的回收、连接、克隆和测序 | 第135页 |
| ·生物信息学分析 | 第135页 |
| 第三节 结果与讨论 | 第135-149页 |
| ·LjAOS cDNA的全长克隆和性质分析 | 第135-136页 |
| ·LjAOS推导的蛋白质序列的性质分析 | 第136-139页 |
| ·LiAOS的分子进化分析 | 第139-145页 |
| ·LiAOS蛋白的二级结构分析 | 第145页 |
| ·LiAOS蛋白的三级结构预测 | 第145-146页 |
| ·LjAOS蛋白的叶绿体前导肽预测 | 第146-147页 |
| ·LjAOS的Southern杂交结果 | 第147-148页 |
| ·LjAOS基因的组织特异性表达分析 | 第148-149页 |
| 第四节 LjAOS小结 | 第149-150页 |
| 参考文献 | 第150-165页 |
| 参考书 | 第165-166页 |
| 附录 | 第166-167页 |
| 创新点 | 第167-168页 |
| 在读期间从事和参与的其他研究工作 | 第168页 |
| 在读期间获得和参与的基金项目 | 第168页 |
| 学术活动 | 第168-169页 |
| 论文发表情况 | 第169-171页 |
| 致谢 | 第171-174页 |
