| 文献综述 | 第1-26页 |
| 1.高等植物光受体的结构、类型、功能和细胞定位 | 第10-14页 |
| ·光敏色素 | 第10-12页 |
| ·隐花色素 | 第12页 |
| ·向光色素 | 第12-14页 |
| 2.光信号的转导 | 第14-22页 |
| ·光敏色素的信号转导 | 第14-15页 |
| ·隐花色素相关信号转导 | 第15-16页 |
| ·向光色素信号传导 | 第16-19页 |
| ·NPH3蛋白 | 第16页 |
| ·RPT2蛋白 | 第16-17页 |
| ·NPH4/ARF7蛋白 | 第17页 |
| ·Ca~(2+)在向光反应信号转导中的作用 | 第17-18页 |
| ·其它参与向光反应的光受体 | 第18-19页 |
| ·光受体下游信号转导 | 第19-21页 |
| ·光信号转导突变体 | 第21-22页 |
| 3.参考文献 | 第22-26页 |
| 实验部分 | 第26-68页 |
| 一 番茄蓝光受体基因Phototropins RNAi和Overexpression植物表达载体的构建 | 第26-52页 |
| 中文摘要 | 第26页 |
| 英文摘要 | 第26-27页 |
| 前言 | 第27页 |
| 1.试验材料 | 第27-31页 |
| ·番茄蓝光受体基因片断的获得及其RNAi载体的构建试验材料 | 第27-30页 |
| ·菌株与质粒 | 第27-28页 |
| ·培养基 | 第28-29页 |
| ·主要试剂 | 第29页 |
| ·抗生素 | 第29页 |
| ·细菌感受态细胞制备试剂 | 第29页 |
| ·DNA快速裂解液 | 第29页 |
| ·DNA marker | 第29页 |
| ·试剂盒 | 第29页 |
| ·限制性内切酶 | 第29页 |
| ·DNA的琼脂糖凝胶电泳试剂 | 第29页 |
| ·主要设备和仪器 | 第29-30页 |
| ·番茄蓝光受体Phototropin-2基因全长的获得及其Overexpression载体的构建试验材料 | 第30-31页 |
| ·菌株与质粒 | 第30页 |
| ·培养基 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30-31页 |
| ·抗生素 | 第30页 |
| ·高频感受态细胞的制备试剂 | 第30页 |
| ·DNA marker | 第30页 |
| ·试剂盒 | 第30-31页 |
| ·限制性内切酶 | 第31页 |
| ·番茄种子AC~+ | 第31页 |
| ·DNA的琼脂糖凝胶电泳试剂 | 第31页 |
| ·主要设备和仪器 | 第31页 |
| 2.试验方法 | 第31-40页 |
| ·番茄蓝光受体基因片断的获得及其RNAi载体的构建试验方法 | 第31-38页 |
| ·番茄蓝光受体基因片断的获得 | 第31-32页 |
| ·根据生物信息学方法获得番茄蓝光受体基因序列 | 第31页 |
| ·对TP1,TP2两片断进行生物信息学分析 | 第31页 |
| ·TP1,TP2引物设计 | 第31-32页 |
| ·PCR扩增反应 | 第32页 |
| ·产物凝胶电泳 | 第32页 |
| ·TP1,TP2基因NNAi载体的构建 | 第32-33页 |
| ·TP1,TP2基因片断生物信息学分析及正反向插入片断的选择 | 第32页 |
| ·TP1,TP2正反向片断的获得 | 第32-33页 |
| ·TP1,TP2正反向片断的T-A克隆,转化细菌和验证 | 第33-35页 |
| ·TP1,TP2正反向片断与pMD-18载体的连接 | 第33页 |
| ·大肠杆菌DH5 α感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第34页 |
| ·重组质粒的快速提取鉴定 | 第34页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第34-35页 |
| ·TP1,TP2正向片断与pSK载体的连接,转化和验证 | 第35-36页 |
| ·TP1,TP2正向片段双酶切产物的凝胶回收 | 第35页 |
| ·中间载体pSK双酶切产物回收 | 第35页 |
| ·酶切回收后的TP1,TP2正向片段与pSK中间载体的连接 | 第35页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第35-36页 |
| ·重组质粒的快提检验和酶切鉴定 | 第36页 |
| ·带TP1,TP2正向片段的中间载体pSK与TP1、TP2反向片段的连接,转化和验证 | 第36页 |
| ·TP1,TP2反向片段的双酶切及其凝胶回收 | 第36页 |
| ·带TP1,TP2正向片段的中间载体pSK的双酶切及凝胶回收 | 第36页 |
| ·两步获得片断和载体的连接 | 第36页 |
| ·重组质粒的转化和验证 | 第36页 |
| ·TP1,TP2正反向片断与植物表达载体pHB的连接,转化和鉴定 | 第36-37页 |
| ·TP1,TP2正反向片断的双酶切及凝胶回收 | 第36页 |
| ·植物载体pHB的双酶切及凝胶回收 | 第36-37页 |
| ·两步获得片断和载体的连接 | 第37页 |
| ·重组pHB质粒转化大肠杆菌 | 第37页 |
| ·重组质粒的快提和双酶切鉴定 | 第37页 |
| ·重组pHB质粒转化农杆菌 | 第37-38页 |
| ·农杆菌EHA105感受态的制备 | 第37-38页 |
| ·重组质粒通过冻融法直接转化农杆菌 | 第38页 |
| ·农杆菌的PCR鉴定 | 第38页 |
| ·番茄蓝光受体Phototropin-2基因全长的获得及其Overexpression载体的构建试验方法 | 第38-40页 |
| ·引物设计 | 第38-39页 |
| ·番茄总RNA的提取 | 第39页 |
| ·番茄TP2基因3’及5’末端片断的获得 | 第39页 |
| ·番茄TP2基因3’及5’末端片断的克隆及测序分析 | 第39页 |
| ·番茄TP2基因全长的获得和测序及其开放阅读框分析 | 第39-40页 |
| ·番茄TP2基因全长的获得和测序 | 第39-40页 |
| ·番茄TP2基因全长的开放阅读框分析 | 第40页 |
| ·番茄TP2基因过量表达载体的构建及测序 | 第40页 |
| ·过量表达载体转化农杆菌 | 第40页 |
| 3.结果与分析 | 第40-49页 |
| ·番茄蓝光受体基因片断的获得及其RNAi载体的构建试验结果 | 第40-43页 |
| ·番茄蓝光受体TP1,2基因PCR扩增结果 | 第40-41页 |
| ·番茄蓝光受体TP1,TP2正反向片断的PCR扩增结果 | 第41页 |
| ·TP1,2正向片断与pSK载体连接产物转化大肠杆菌重组子的PCR鉴定和酶切鉴定 | 第41-42页 |
| ·TP1,2正向片断和反向片断与pSK载体连接产物转化大肠杆菌重组子的双酶切鉴定 | 第42-43页 |
| ·TP1,2正向片断和反向片断与pHB载体连接产物转化农杆菌重组子的PCR鉴定 | 第43页 |
| ·番茄蓝光受体Phototropin-2基因全长的获得及其Overexpression载体的构建试验结果 | 第43-49页 |
| ·番茄PHOT-2基因3’及5’末端片断的克隆 | 第43-44页 |
| ·番茄PHOT-2基因3’及5’末端片断的序列分析 | 第44页 |
| ·番茄PHOT-2基因全长的克隆 | 第44页 |
| ·番茄PHOT-2基因与相关物种的序列同源分析及进化树的绘制 | 第44-49页 |
| ·番茄PHOT-2基因过量表达载体的构建 | 第49页 |
| 4.讨论 | 第49-51页 |
| ·构建RNAi载体时TP1,2正反向片断的选择 | 第49-50页 |
| ·植物双原表达载体的选择和构建 | 第50页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第50-51页 |
| 5.参考文献 | 第51-52页 |
| 二 番茄蓝光受体Phototropins RNAi植物表达载体的转化番茄研究 | 第52-68页 |
| 中文摘要 | 第52页 |
| 英文摘要 | 第52页 |
| 前言 | 第52页 |
| 1.试验材料 | 第52-55页 |
| ·传统的农杆菌侵染叶盘法试验材料 | 第52-55页 |
| ·番茄种子 | 第52-53页 |
| ·培养基 | 第53-54页 |
| ·MS培养基 | 第53页 |
| ·LB培养基 | 第53页 |
| ·YEP培养基 | 第53页 |
| ·Nitch Vitamins | 第53页 |
| ·发苗培养基 | 第53页 |
| ·农杆菌重悬液 | 第53-54页 |
| ·子叶预培养培养基 | 第54页 |
| ·子叶与农杆菌共培养培养基 | 第54页 |
| ·植株再生培养基 | 第54页 |
| ·植株生根培养基 | 第54页 |
| ·植物DNA提取缓冲液 | 第54页 |
| ·主要试剂 | 第54-55页 |
| ·植物激素 | 第54页 |
| ·抗生素 | 第54页 |
| ·除草剂Basta | 第54页 |
| ·其它试剂 | 第54-55页 |
| ·主要设备和仪器 | 第55页 |
| ·农杆菌注射果实瞬时表达法试验材料 | 第55页 |
| ·番茄幼嫩果实 | 第55页 |
| ·培养基 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·主要设备和仪器 | 第55页 |
| 2.试验方法 | 第55-58页 |
| ·传统的农杆菌侵染叶盘法 | 第55-58页 |
| ·转基因番茄的获得 | 第55-57页 |
| ·植物材料的准备 | 第55-56页 |
| ·测量农杆菌的生长曲线 | 第56页 |
| ·重组农杆菌 | 第56页 |
| ·转化 | 第56-57页 |
| ·除草剂Basta适宜浓度的验证 | 第57页 |
| ·再生植株的PCR检测 | 第57-58页 |
| ·植物总DNA的提取 | 第57页 |
| ·异常分化植株与正常分化植株的Basta抗性基因片断的PCR检测 | 第57-58页 |
| ·农杆菌注射果实瞬时表达法 | 第58页 |
| ·挑菌单克隆 | 第58页 |
| ·诱导培养 | 第58页 |
| ·温和培养 | 第58页 |
| ·注射果实 | 第58页 |
| ·观察果实 | 第58页 |
| 3.结果与分析 | 第58-62页 |
| ·农杆菌转染不同实验条件结果的比较 | 第58-62页 |
| ·番茄种子萌发经春化和不经春化的结果比较 | 第58-59页 |
| ·农杆菌EHA105生长曲线的绘制 | 第59-60页 |
| ·外植体经不同浓度农杆菌浸染后的分化情况 | 第60页 |
| ·外植体经不同浓度农杆菌浸染后的分化情况 | 第60-61页 |
| ·Basta适宜选择浓度的验证 | 第61页 |
| ·异常分化植株与正常分化植株的Basta抗性基因片断的PCR检测 | 第61-62页 |
| ·生物信息学方法预测RNAi载体转录物结构 | 第62页 |
| ·农杆菌注射果实瞬时表达法 | 第62页 |
| 4.讨论 | 第62-67页 |
| ·植物种子春化处理 | 第62-63页 |
| ·植物组织培养技术原理 | 第63页 |
| ·关于研究基因沉默的两种系统 | 第63-64页 |
| ·稳态系统 | 第63-64页 |
| ·暂态系统 | 第64页 |
| ·关于外源基因导入植物的方法 | 第64-65页 |
| ·影响转化效率的因素 | 第65-66页 |
| ·基因型的依赖性 | 第65页 |
| ·浸染农杆菌的浓度 | 第65-66页 |
| ·植物细胞的感受态状况 | 第66页 |
| ·基因沉默导致再生植株异常分化的原因探讨 | 第66-67页 |
| 5.参考文献 | 第67-68页 |
| 结论 | 第68-69页 |
| 附图 | 第69-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 发表文章目录 | 第72-73页 |
