| 本论文的创新性研究工作 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第6-7页 |
| 英文摘要 | 第7-9页 |
| 前言 | 第9-12页 |
| 1 实验材料 | 第12-15页 |
| ·菌、毒株及质粒 | 第12页 |
| ·主要药品及试剂 | 第12页 |
| ·主要溶液的配制 | 第12-14页 |
| ·质粒提取用溶液 | 第12-13页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳相关溶液 | 第13页 |
| ·SDS-PAGE电泳常用液体 | 第13-14页 |
| ·Ni-MIAC纯化、复性重组蛋白的溶液 | 第14页 |
| ·主要仪器及分析软件 | 第14-15页 |
| 2 实验方法 | 第15-23页 |
| ·鸭α-干扰素基因原核表达载体的构建 | 第15-18页 |
| ·鸭α-IFN成熟肽基因原核表达载体的构建 | 第15-18页 |
| ·鸭a-IFN成熟肽基因的克隆、测序 | 第15-16页 |
| ·表达载体的构建 | 第16-18页 |
| ·鸭α-干扰素基因ORF原核表达载体的构建 | 第18页 |
| ·工程菌的诱导表达及表达形式分析 | 第18-19页 |
| ·鸭α-IFN复性条件的初步探索 | 第19-20页 |
| ·鸭α-IFN抗VSV活性研究 | 第20-22页 |
| ·pET32a~+-DuIFN-α的提取、纯化及复性效果评定 | 第20-22页 |
| ·提取、纯化及稀释复性 | 第20-21页 |
| ·Ni-MIAC复性 | 第21-22页 |
| ·pET32a~+-DuIFN-α ORF的纯化及复性效果评定 | 第22页 |
| ·抗DPV强毒的研究 | 第22-23页 |
| ·DPV强毒的接种、收获 | 第22页 |
| ·DPV强毒毒价测定 | 第22页 |
| ·定量PCR对DuIFN-α抗DPV强毒活性的研究 | 第22-23页 |
| ·实验分组及样品的制备 | 第22-23页 |
| ·定量-PCR检测 | 第23页 |
| 3 结果 | 第23-33页 |
| ·鸭α-IFN表达载体的构建 | 第23-24页 |
| ·鸭α-IFN成熟片段基因的克隆、测序与表达载体的构建 | 第23-24页 |
| ·鸭α-IFN ORF表达载体的构建 | 第24页 |
| ·鸭α-IFN工程菌的诱导表达 | 第24-25页 |
| ·包涵体复性条件的初步探索 | 第25-28页 |
| ·不同蛋白浓度和流加速度对复性的影响 | 第25-26页 |
| ·体系中盐酸胍添加量和蛋白浓度对复性的影响 | 第26页 |
| ·蛋白浓度和GSH/GSSG对复性的影响 | 第26-27页 |
| ·L-Arg对复性的影响 | 第27-28页 |
| ·L-Arg与GSH:GSSG共同对复性的影响 | 第28页 |
| ·鸭α-IFN抗VSV活性研究 | 第28-31页 |
| ·pET32a~+-DuIFN-α的稀释复性及抗vsv效价评定 | 第28-29页 |
| ·pET32a~+-DuIFN-α的Ni-MIAC复性及抗vsv效价评定 | 第29-30页 |
| ·pET32a~+-DuIFN-α ORF的Ni-MIAC复性及效价评定 | 第30-31页 |
| ·重组鸭α-IFN的抗DPV强毒活性 | 第31-33页 |
| 4 讨论 | 第33-38页 |
| ·表达成熟蛋白的意义 | 第33页 |
| ·载体与菌株的选择 | 第33-34页 |
| ·对鸭α-IFN复性的探讨 | 第34-36页 |
| ·重组鸭α-IFN抗病毒活性的初步评价 | 第36-38页 |
| ·定量-PCR对DuIFN-α抗DPV强毒研究的意义 | 第36-37页 |
| ·VSV效价评定体系在生产及研究中的应用 | 第37-38页 |
| 5 结论 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-44页 |
| 附录 | 第44-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第48页 |
