| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-53页 |
| 第一章 副溶血弧菌的特性 | 第15-20页 |
| 1 副溶血弧菌的分类地位和生化特性 | 第15页 |
| 2 副溶血弧菌的致病性 | 第15页 |
| 3 副溶血弧菌的毒力因子 | 第15-16页 |
| 4 副溶血弧菌的血清型 | 第16页 |
| 5 副溶血弧菌的鉴定 | 第16页 |
| 参考文献 | 第16-20页 |
| 第二章 水产养殖动物病原菌的主要保护性抗原研究进展 | 第20-39页 |
| 一 抗原的类型 | 第20-21页 |
| 二 主要保护性抗原 | 第21-31页 |
| 1 荚膜多糖 | 第21页 |
| 2 脂多糖LPS | 第21-24页 |
| ·LPS的结构 | 第21-22页 |
| ·LPS对动物的毒性 | 第22页 |
| ·LPS的免疫原性 | 第22-24页 |
| 3 外膜蛋白OMP | 第24-29页 |
| ·外膜蛋白的组成 | 第24页 |
| ·主要外膜蛋白 | 第24-26页 |
| ·OMP的致病机理 | 第26页 |
| ·OMP与LPS的相互作用 | 第26-27页 |
| ·OMP的免疫特性 | 第27-29页 |
| ·OMP的应用前景 | 第29页 |
| 4 其他蛋白、蛋白酶和毒素 | 第29-30页 |
| ·热休克蛋白 | 第29-30页 |
| ·蛋白酶和外毒素 | 第30页 |
| 5 小结 | 第30-31页 |
| 参考文献 | 第31-39页 |
| 第三章 弧菌的主要外膜蛋白研究进展 | 第39-53页 |
| 一 OmpU和OmpT | 第39-42页 |
| 1 霍乱弧菌的OmpU和OmpT | 第39-42页 |
| 2 其它弧菌的ompU | 第42页 |
| 3 OmpU的免疫原性 | 第42页 |
| 二 TolC | 第42-43页 |
| 三 OmpW和ompV | 第43-45页 |
| 四 OmpK | 第45页 |
| 五 铁调外膜蛋白 | 第45-48页 |
| 六 其他蛋白 | 第48-49页 |
| 七 小结 | 第49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 第二部分 研究内容 | 第53-102页 |
| 第一章 副溶血弧菌外膜蛋白的SDS-PAGE及其免疫特性 | 第54-64页 |
| 摘要 | 第54-55页 |
| 引言 | 第55页 |
| 1 材料与方法 | 第55-57页 |
| ·材料 | 第55页 |
| ·菌株 | 第55页 |
| ·试剂 | 第55页 |
| ·方法 | 第55-57页 |
| ·大黄鱼免疫球蛋白的纯化 | 第55-56页 |
| ·外膜蛋白的提取 | 第56页 |
| ·副溶血弧菌FKC的制备 | 第56页 |
| ·兔抗血清的制备 | 第56页 |
| ·感染后大黄鱼恢复期血清的获取 | 第56页 |
| ·SDS-PAGE | 第56页 |
| ·免疫印迹 | 第56-57页 |
| 2 结果 | 第57-60页 |
| ·大黄鱼免疫球蛋白的纯化 | 第57页 |
| ·副溶血弧菌OMP的组成 | 第57-58页 |
| ·OMP兔抗血清对外膜蛋白的免疫印迹 | 第58页 |
| ·兔抗副溶血弧菌FKC对外膜蛋白的免疫印迹 | 第58-59页 |
| ·大黄鱼恢复期血清对外膜蛋白的免疫印迹 | 第59-60页 |
| 3 讨论 | 第60-63页 |
| 参考文献 | 第63-64页 |
| 第二章 副溶血弧菌zj2003株21kDa主要外膜蛋白的克隆与原核表达 | 第64-71页 |
| 摘要 | 第64页 |
| 引言 | 第64-65页 |
| 1 材料与方法 | 第65-66页 |
| ·菌株 | 第65页 |
| ·表达载体与菌株 | 第65页 |
| ·分子生物学试剂 | 第65页 |
| ·N端氨基酸测序 | 第65页 |
| ·目的基因的克隆 | 第65页 |
| ·表达载体的构建 | 第65页 |
| ·外膜蛋白在BL_(21)(DE_3)的表达 | 第65页 |
| ·包涵体的纯化 | 第65-66页 |
| ·镍柱Ni-IDA纯化重组蛋白 | 第66页 |
| ·重组蛋白多抗的制备 | 第66页 |
| ·重组蛋白的免疫印迹 | 第66页 |
| 2 结果 | 第66-68页 |
| ·21kDa外膜蛋白N端氨基酸测序结果 | 第66-67页 |
| ·ompW基因的克隆与原核表达载体构建结果 | 第67页 |
| ·ompW的诱导表达与纯化 | 第67-68页 |
| ·重组ompW的免疫印迹 | 第68页 |
| 3 讨论 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-71页 |
| 第三章 副溶血弧菌zj2003株六种外膜蛋白的克隆、表达和免疫特性 | 第71-80页 |
| 摘要 | 第71页 |
| 引言 | 第71-72页 |
| 1 材料与方法 | 第72-74页 |
| ·菌株 | 第72页 |
| ·表达载体和菌株 | 第72页 |
| ·分子生物学试剂 | 第72页 |
| ·外膜蛋白的基因克隆 | 第72-73页 |
| ·表达载体的构建 | 第73页 |
| ·外膜蛋白在BL_(21)(DE_3)的表达 | 第73页 |
| ·外膜蛋白的纯化 | 第73页 |
| ·外膜蛋白的免疫印迹 | 第73-74页 |
| 2 结果 | 第74-76页 |
| ·外膜蛋白成熟蛋白编码序列的PCR | 第74页 |
| ·pET30a-OMP表达载体的构建和鉴定结果 | 第74-75页 |
| ·OMP的表达和纯化 | 第75页 |
| ·多抗对重组外膜蛋白的识别 | 第75-76页 |
| 3 讨论 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-80页 |
| 第四章 副溶血弧菌七种外膜蛋白对大黄鱼的免疫原性 | 第80-91页 |
| 摘要 | 第80页 |
| 引言 | 第80-81页 |
| 1 材料与方法 | 第81-82页 |
| ·实验鱼 | 第81页 |
| ·免疫用抗原 | 第81页 |
| ·取血与攻击试验 | 第81页 |
| ·ELISA检测特异性抗体效价 | 第81-82页 |
| ·免疫印迹 | 第82页 |
| 2 结果 | 第82-85页 |
| ·免疫后4-8周内试验鱼的抗体效价 | 第82-83页 |
| ·恢复期大黄鱼血清对重组外膜蛋白的识别 | 第83-84页 |
| ·试验鱼的免疫保护率 | 第84-85页 |
| 3 讨论 | 第85-88页 |
| 参考文献 | 第88-91页 |
| 第五章 副溶血弧菌铁调外膜蛋白pvuA真核表达载体的构建和DNA疫苗对大黄鱼的免疫原性 | 第91-102页 |
| 摘要 | 第91页 |
| 引言 | 第91-93页 |
| 1 材料与方法 | 第93-95页 |
| ·质粒、菌株和细胞 | 第93页 |
| ·主要试剂 | 第93页 |
| ·PvuA真核表达质粒的构建 | 第93-94页 |
| ·高纯度质粒抽提 | 第94页 |
| ·Vero细胞的培养 | 第94页 |
| ·Vero细胞的转染 | 第94页 |
| ·重组质粒pCI-pvuA1-EGFP的体内表达 | 第94-95页 |
| ·人工攻击试验和免疫保护率 | 第95页 |
| ·免疫鱼血清对重组蛋白的Western Blot | 第95页 |
| 2 结果 | 第95-97页 |
| ·PvuA1的PCR和pCI-pvuA1-EGFP重组载体的构建 | 第95页 |
| ·pCI-pvuA1-EGFP重组质粒的体外表达 | 第95-96页 |
| ·免疫鱼血清对纯化重组蛋白pvuA的印迹反应 | 第96页 |
| ·pCI-pvuA1-EGFP重组质粒对大黄鱼的免疫保护效果 | 第96-97页 |
| 3 讨论 | 第97-100页 |
| 参考文献 | 第100-102页 |
| 第三部分 总结与展望 | 第102-106页 |
| 1.结论及主要创新点 | 第103-104页 |
| 2.不足与展望 | 第104-106页 |
| 第四部分 附录 | 第106-115页 |
| 附录1 攻读博士学位期间发表和录用的学术论文 | 第107-108页 |
| 附录2 本论文克隆的基因序列 | 第108-114页 |
| 附录3 致谢 | 第114-115页 |
