| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-51页 |
| ·Mg~(2+)的生物化学概述 | 第15-20页 |
| ·Mg~(2+)的化学性质 | 第16-17页 |
| ·Mg~(2+)转运研究中的Mg~(2+)测量技术 | 第17-20页 |
| ·原子吸收分光光度法 | 第18页 |
| ·Mg~(2+)同位素的应用 | 第18-19页 |
| ·荧光探针的应用 | 第19页 |
| ·其他测定技术 | 第19-20页 |
| ·原核生物Mg~(2+)转运系统 | 第20-44页 |
| ·MgtA/B Mg~(2+)转运系统 | 第22-26页 |
| ·MgtA/B 的转录调控与生理作用 | 第22-24页 |
| ·MgtA/B 的结构与功能 | 第24-26页 |
| ·MgtE Mg~(2+)转运系统 | 第26-27页 |
| ·CorA Mg~(2+)转运系统 | 第27-44页 |
| ·CorA 物种分布和分类 | 第27-32页 |
| ·CorA 的生理功能 | 第32-34页 |
| ·CorA 的拓朴结构 | 第34-37页 |
| ·海栖热孢菌CorA 的晶体结构概述 | 第37-38页 |
| ·海栖热孢菌CorA 的别构调节位点 | 第38-39页 |
| ·海栖热孢菌CorA 晶体结构表面的电荷分布 | 第39-40页 |
| ·海栖热孢菌CorA 的Mg~(2+)转运通道 | 第40-42页 |
| ·海栖热孢菌CorA 转运过程中的“开/关”循环模型 | 第42-44页 |
| ·其他Mg~(2+)转运系统简介 | 第44-49页 |
| ·阳离子通道类 | 第45-47页 |
| ·Na/K 交换体类 | 第47-49页 |
| ·本研究的意义 | 第49-51页 |
| 第2章 大肠杆菌CORA 拓朴结构的研究 | 第51-65页 |
| ·材料与方法 | 第52-56页 |
| ·菌株与质粒 | 第52-53页 |
| ·培养基与试剂 | 第53-54页 |
| ·酵母突变体互补测试 | 第54页 |
| ·细菌原生质体制备 | 第54-55页 |
| ·抗体标记及免疫测定 | 第55-56页 |
| ·结果与分析 | 第56-63页 |
| ·EcCorA 转运活性的酵母突变体互补测定 | 第56-58页 |
| ·添加N-、C-端融合标签EcCorA 蛋白转运活性的互补检测 | 第58-59页 |
| ·重组CorA 蛋白N-、C-端6×组氨酸标签的位置检测 | 第59-60页 |
| ·带有N-和C-末端6×组氨酸标签的Tm CorA 转运活性的互补测定 | 第60-61页 |
| ·TmCorA N-、C-末端位置测定 | 第61-63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| 第3章 大肠杆菌CORA 间质结构域结构与功能的研究 | 第65-89页 |
| ·材料与方法 | 第66-72页 |
| ·菌株与培养基 | 第66页 |
| ·PPD、C191A、PPDH 表达质粒构建 | 第66-67页 |
| ·EcCorA-PPD 相关蛋白的表达与纯化 | 第67-69页 |
| ·EcCorA 蛋白的表达与纯化 | 第69-70页 |
| ·GST-EcCorA-PPD、EcCorA-PPD 的电镜观察及图像处理 | 第70-71页 |
| ·园二色光谱测定 | 第71页 |
| ·荧光光谱法测定底物结合/解离常数 | 第71-72页 |
| ·结果与分析 | 第72-86页 |
| ·EcCorA-PPD 相关蛋白表达条件的优化 | 第72-73页 |
| ·EcCorA-PPD 相关蛋白的提取与亲合纯化 | 第73-78页 |
| ·GST-EcCorA-PPD 在磷脂单层膜上的二维晶体结构 | 第78-80页 |
| ·EcCorA-PPD 在水溶液中的结构 | 第80-82页 |
| ·EcCorA-PPD 和EcCorA 具有相似的二级结构 | 第82-84页 |
| ·EcCorA-PPD 和EcCorA 具有相似的底物结合能力 | 第84-86页 |
| ·讨论 | 第86-89页 |
| 第4章 大肠杆菌CORA 间质结构域区转运相关氨基酸残基的点突变分析 | 第89-104页 |
| ·材料与方法 | 第90-94页 |
| ·菌株与质粒 | 第90-92页 |
| ·试剂与培养基 | 第92-93页 |
| ·酵母的遗传转化 | 第93页 |
| ·酵母转化子EcCorA 表达水平的检测 | 第93-94页 |
| ·Mg~(2+)缺陷生长表型鉴定 | 第94页 |
| ·结果与分析 | 第94-100页 |
| ·EcCorA 的删除突变分析 | 第94-96页 |
| ·EcCorA 的点突变体蛋白在酵母的表达水平检测 | 第96-98页 |
| ·EcCorA 的点突变分析 | 第98-100页 |
| ·讨论 | 第100-104页 |
| 第5章 大肠杆菌CORA 脂质体功能重组及转运动力学特性的初步研究 | 第104-119页 |
| ·材料与方法 | 第105-108页 |
| ·EcCorA 蛋白的提取与纯化 | 第105-106页 |
| ·E. coli 总膜脂脂质体的制备 | 第106页 |
| ·EcCorA 的功能重组 | 第106-107页 |
| ·EcCorA 转运活性的测定 | 第107页 |
| ·数据处理 | 第107-108页 |
| ·结果与分析 | 第108-118页 |
| ·EcCorA 的重组 | 第108-109页 |
| ·EcCorA 重组脂质体形态及完整性的检测 | 第109-110页 |
| ·EcCorA 蛋白插入方向的检测 | 第110-111页 |
| ·蛋白脂质体跨膜电势梯度的建立 | 第111-112页 |
| ·Calcein 荧光探针的标定 | 第112-113页 |
| ·EcCorA 转运活性的测定 | 第113-114页 |
| ·EcCorA 转运体转运参数的测定 | 第114-116页 |
| ·EcCorA 转运体驱动力来源的初步测定 | 第116-118页 |
| ·讨论 | 第118-119页 |
| 第6章 论文总结 | 第119-123页 |
| ·论文总结 | 第119-121页 |
| ·工作中待解决的问题 | 第121-123页 |
| 参考文献 | 第123-137页 |
| 致谢 | 第137-138页 |
| 个人简历、在学期间的研究成果及发表的论文 | 第138页 |
