| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-10页 |
| 1 前言 | 第10-25页 |
| ·腐烂茎线虫概述 | 第11-12页 |
| ·名称 | 第11页 |
| ·分类地位 | 第11页 |
| ·地理分布 | 第11页 |
| ·腐烂茎线虫的生物学特性 | 第11页 |
| ·腐烂茎线虫的危害 | 第11-12页 |
| ·腐烂茎线虫的寄主范围和致病性 | 第12页 |
| ·植物寄生线虫的分类鉴定方法 | 第12-25页 |
| ·植物线虫的形态分类 | 第12-13页 |
| ·生物化学技术 | 第13-14页 |
| ·蛋白质、同工酶的分析 | 第13-14页 |
| ·血清学方法 | 第14页 |
| ·DNA 指纹技术 | 第14-25页 |
| ·限制片段长度多态性 | 第15-16页 |
| ·特异性杂交探针 | 第16-17页 |
| ·随机扩增多态性 | 第17页 |
| ·扩增片段长度多态性 | 第17-18页 |
| ·核酸序列分析技术 | 第18页 |
| ·微卫星DNA 标记技术 | 第18页 |
| ·单核苷酸多态性标记技术 | 第18页 |
| ·PCR（聚合酶链式反应）技术 | 第18-19页 |
| ·实时荧光PCR 检测技术 | 第19-25页 |
| ·TaqMan 探针 | 第19-21页 |
| ·Amplisensor | 第21-22页 |
| ·Molecular beacon | 第22-23页 |
| ·杂交双探针 | 第23页 |
| ·复合探针法 | 第23-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-33页 |
| ·材料 | 第25-26页 |
| ·样品来源 | 第25页 |
| ·供试载体、宿主菌株 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·分子生物学试剂 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-33页 |
| ·薯块中线虫的分离 | 第26页 |
| ·线虫的培养 | 第26-27页 |
| ·线虫的消毒 | 第26页 |
| ·茄腐镰刀菌(Fusarium solani)培养线虫 | 第26页 |
| ·胡萝卜愈伤组织培养线虫 | 第26-27页 |
| ·形态鉴定 | 第27页 |
| ·线虫的杀死固定 | 第27页 |
| ·制片 | 第27页 |
| ·线虫的观察鉴定方法 | 第27页 |
| ·rDNA-ITS 序列分析 | 第27-31页 |
| ·DNA 的制备 | 第27-28页 |
| ·线虫的洗涤 | 第27-28页 |
| ·苯酚－异戊醇抽提法 | 第28页 |
| ·单条线虫DNA 的提取 | 第28页 |
| ·PCR 扩增 | 第28-29页 |
| ·电泳分析 | 第29页 |
| ·产物回收 | 第29页 |
| ·克隆和转化 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·与pMD18-T 载体连接 | 第29-30页 |
| ·转化 | 第30页 |
| ·重组质粒的提取及鉴定 | 第30页 |
| ·克隆片段同分析源性 | 第30-31页 |
| ·实时荧光PCR 检测马铃薯腐烂茎线虫的研究 | 第31-33页 |
| ·TaqMan 探针与引物的设计和合成 | 第31页 |
| ·实时荧光PCR 检测 | 第31-32页 |
| ·7700 SDS 软件的设置 | 第32页 |
| ·数据分析和结果输出 | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-42页 |
| ·危害寄主症状观察 | 第33页 |
| ·线虫培养结果 | 第33-34页 |
| ·形态特征鉴定的比较分析 | 第34-37页 |
| ·形态测量值 | 第34-35页 |
| ·形态特征描述 | 第35-37页 |
| ·基因组DNA 的提取及PCR 产物结果分析 | 第37-40页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第37页 |
| ·rDNA-ITS-PCR 扩增结果 | 第37页 |
| ·质粒PCR 鉴定 | 第37-38页 |
| ·序列分析 | 第38-39页 |
| ·ITS 序列的系统发育分析 | 第39-40页 |
| ·实时荧光PCR 检测结果 | 第40-42页 |
| ·优化引物浓度 | 第40页 |
| ·优化镁离子浓度 | 第40-41页 |
| ·探针浓度优化 | 第41页 |
| ·探针灵敏度检测 | 第41-42页 |
| ·TaqMan 探针专化性检测 | 第42页 |
| 4 讨论 | 第42-47页 |
| ·关于马铃薯腐烂茎线虫及其与近似种间形态鉴定的讨论 | 第42-43页 |
| ·关于马铃薯茎线虫培养条件的筛选 | 第43-44页 |
| ·线虫DNA 的提取 | 第44页 |
| ·在 PCR 扩增中遇到的一些问题 | 第44-45页 |
| ·关于马铃薯茎线虫 rDNA-ITS 区序列分析 | 第45-46页 |
| ·影响探针灵敏度的可能因素 | 第46-47页 |
| 5 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 缩略语 | 第53-54页 |
| 附录A: 培养基及溶液的配制 | 第54-56页 |
| 附录B: 测序比对结果 | 第56-59页 |
| 致谢 | 第59页 |