| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-22页 |
| ·细胞色素P450的研究概况 | 第10-12页 |
| ·细胞色素P450种类多样性 | 第10-11页 |
| ·细胞色素P450催化机理及其功能多样性 | 第11页 |
| ·细胞色素P450底物的广谱性 | 第11-12页 |
| ·真菌细胞色素P450 | 第12-13页 |
| ·甾醇14α-去甲基化酶 | 第13-19页 |
| ·甾醇14α-去甲基化酶概述 | 第13-15页 |
| ·甾醇14α-去甲基化酶催化机理 | 第15-17页 |
| ·甾醇14α-去甲基化酶的结构研究 | 第17-19页 |
| ·CYP51蛋白底物进出通道 | 第18页 |
| ·CYP51蛋白底物与CYP51的结合作用 | 第18页 |
| ·CYP51蛋白活性位点结构特点 | 第18-19页 |
| ·14α-去甲基化酶抑制剂研究概况 | 第19-22页 |
| ·14α-去甲基化酶抑制剂作用机制 | 第19页 |
| ·CYP51基因与真菌对DMIs的抗性关系 | 第19-22页 |
| ·CYP51发生点突变导致真菌对DMIs产生抗性 | 第20页 |
| ·CYP51基因表达水平的改变 | 第20-22页 |
| 第二章 柑桔绿霉菌CYP51的克隆表达及多克隆抗体的制备 | 第22-44页 |
| ·实验材料 | 第22-25页 |
| ·菌株和质粒 | 第22页 |
| ·化学试剂及抗菌素 | 第22页 |
| ·常用贮存液 | 第22页 |
| ·工具酶与其它试剂 | 第22-23页 |
| ·培养基 | 第23页 |
| ·常用缓冲液 | 第23-25页 |
| ·实验方法 | 第25-32页 |
| ·真菌DNA的提取 | 第25页 |
| ·真菌RNA的提取 | 第25-26页 |
| ·柑橘绿霉菌CYP51 cDNA的合成 | 第26-27页 |
| ·DNA限制性内切酶消化 | 第27页 |
| ·DNA片断的回收和连接 | 第27页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第28页 |
| ·α互补法筛选阳性克隆 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第29页 |
| ·重组蛋白的原核表达 | 第29页 |
| ·重组目的蛋白的大量表达 | 第29-30页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第30页 |
| ·重组蛋白的透析、浓缩和定量 | 第30-31页 |
| ·纯化重组蛋白多克隆抗体的制备及效价的测定 | 第31页 |
| ·Western blot分析 | 第31-32页 |
| ·结果及分析 | 第32-41页 |
| ·柑橘绿霉菌RNA和DNA的提取 | 第32页 |
| ·RT-PCR扩增柑橘绿霉菌CYP51 cDNA | 第32-33页 |
| ·柑橘绿霉菌CYP51 cDNA重组克隆载体的构建 | 第33-34页 |
| ·柑橘绿霉菌CYP51 cDNA测序结果分析 | 第34-36页 |
| ·柑橘绿霉菌CYP51 cDNA重组表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·柑橘绿霉菌CYP51 cDNA在大肠杆菌中的表达 | 第37-39页 |
| ·重组柑橘绿霉菌CYP51蛋白的大量表达和纯化 | 第39-40页 |
| ·多克隆抗体的制备和免疫学活性鉴定 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-44页 |
| 第三章 玉米黑粉菌CYP51克隆与表达 | 第44-55页 |
| ·实验材料 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44页 |
| ·扩增玉米黑粉菌CYP51基因的特异性引物的设计 | 第44页 |
| ·玉米黑粉菌CYP51基因的扩增 | 第44页 |
| ·其它实验方法 | 第44页 |
| ·实验结果 | 第44-54页 |
| ·玉米黑粉菌CYP51基因(YH1-14DM)的克隆与表达 | 第44-49页 |
| ·玉米黑粉菌DNA的提取 | 第44-45页 |
| ·PCR扩增玉米黑粉菌YH1-14DM基因 | 第45-46页 |
| ·玉米黑粉菌YH1-14DM重组克隆载体的构建 | 第46页 |
| ·玉米黑粉菌YH1-14DM的测序结果分析 | 第46-48页 |
| ·玉米黑粉菌YH1-14DM重组表达载体的构建及表达 | 第48-49页 |
| ·玉米黑粉菌完整CYP51基因(YH2-14DM)的克隆与表达 | 第49-54页 |
| ·玉米黑粉菌CYP51完整基因的克隆及测序 | 第50-51页 |
| ·玉米黑粉菌YH2-14DM重组表达载体的构建及表达 | 第51-54页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
