| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-27页 |
| ·肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF)的研究进展 | 第11-16页 |
| ·肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的来源及表达 | 第11页 |
| ·TNF-α的基因序列及其分子结构 | 第11-12页 |
| ·TNF-α受体(TNFR)的分类及表达 | 第12页 |
| ·TNF-α的生物学功能及其研究进展 | 第12-16页 |
| ·微小RNA(microRNA,miRNA)的研究进展 | 第16-22页 |
| ·miRNA的生物合成 | 第16-17页 |
| ·miRNA的特征 | 第17-18页 |
| ·miRNA的作用机制 | 第18-20页 |
| ·动物体miRNA与siRNA的区别 | 第20-21页 |
| ·miRNA的生物学意义及其研究进展 | 第21-22页 |
| ·miRNA靶基因的鉴定 | 第22-24页 |
| ·鉴定miRNA靶基因的方法 | 第22-23页 |
| ·双荧光素酶报告基因系统鉴定miRNA靶基因的原理及优势 | 第23-24页 |
| ·mRNA的降解途径 | 第24-26页 |
| ·mRNA的主要降解途径 | 第24-25页 |
| ·ARE调控mRNA稳定性的机制 | 第25页 |
| ·mRNA的其它降解途径及研究进展 | 第25-26页 |
| ·本实验研究的目的和意义 | 第26-27页 |
| 2 材料和方法 | 第27-39页 |
| ·主要仪器设备 | 第27-28页 |
| ·实验所需试剂 | 第28-29页 |
| ·常用试剂的配制 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-39页 |
| ·miRNA的预测 | 第29-30页 |
| ·目的片断序列的设计及PCR钓取 | 第30-31页 |
| ·琼脂凝胶回收 | 第31-32页 |
| ·双酶切PsiCHECKTM-2载体 | 第32-33页 |
| ·目的片断与载体连接 | 第33页 |
| ·连接产物的转化 | 第33-34页 |
| ·重组质粒的检测与抽提 | 第34-35页 |
| ·转染条件的优化 | 第35-37页 |
| ·共转染及双荧光素酶报告基因活性检测 | 第37-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-47页 |
| ·miRNA的预测 | 第39-40页 |
| ·猪与其他哺乳动物标准序列的同源性比对 | 第39页 |
| ·miRNA靶位点序列的比对 | 第39-40页 |
| ·重组质粒测序结果与分析 | 第40-41页 |
| ·重组质粒载体的提取 | 第41-42页 |
| ·转染条件的优化 | 第42-44页 |
| ·Mimics转染条件的优化 | 第42-44页 |
| ·pEGFP-N3质粒转染条件的优化 | 第44页 |
| ·双荧光素酶报告基因活性检测 | 第44-47页 |
| 4.讨论 | 第47-52页 |
| ·AREs负调控mRNA的表达 | 第47-48页 |
| ·ssc-miRNA-369负调控靶位点位于AREs上的TNF-a基因 | 第48-49页 |
| ·miRNAs与AREs的相关性研究 | 第49-52页 |
| 5 结论 | 第52-53页 |
| 6 参考文献 | 第53-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
