| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-48页 |
| 一、多趾及其相关基因的研究概况 | 第11-34页 |
| 1 肢体发育概述 | 第11-14页 |
| 1．1 为什么要研究肢体的发育 | 第11页 |
| 1．2 肢体发育的轴模式及其信号分子 | 第11-14页 |
| 2 多趾(指)的研究概况 | 第14-20页 |
| 2．1 人类多趾的研究概况 | 第14-16页 |
| 2．2 小鼠多趾的研究概况 | 第16-18页 |
| 2．3 鸡多趾的研究概况 | 第18-20页 |
| 2．4 人、鼠和鸡多趾候选区间比较 | 第20页 |
| 3 多趾相关基因及其互作 | 第20-34页 |
| 3．1 shh基因研究进展 | 第20-23页 |
| 3．2 Lmbr1基因研究进展 | 第23-26页 |
| 3．3 Gli3基因 | 第26-30页 |
| 3．4 dHand基因 | 第30-31页 |
| 3．5 Hlxb9/Hb9基因 | 第31页 |
| 3．6 En2基因 | 第31-32页 |
| 3．7 Hox基因 | 第32-34页 |
| 4 本研究的内容及目的 | 第34页 |
| 二、单核昔酸多态性的研究与应用 | 第34-41页 |
| 1 SNP的基本概念与特点 | 第34-36页 |
| 1．1 SNP的基本概念及分类 | 第34-35页 |
| 1．2 SNP的特点 | 第35-36页 |
| 2 SNP的检测技术 | 第36-40页 |
| 2．1 基于 PCR或酶切的方法 | 第36-37页 |
| 2．2 基于分子杂交的方法 | 第37页 |
| 2．3 基于荧光共振能量传递的方法 | 第37-38页 |
| 2．4 基于 DNA构象的方法 | 第38-39页 |
| 2．5 质谱法 | 第39页 |
| 2．6 直接测序方法 | 第39-40页 |
| 2．7 生物信息学方法 | 第40页 |
| 3 SNP的应用前景及存在的问题 | 第40-41页 |
| 3．1 SNP的应用前景 | 第40-41页 |
| 3．2 SNP存在的问题 | 第41页 |
| 三、实时定量 PCR技术的原理与应用 | 第41-48页 |
| 1 实时定量 PCR的发展 | 第41-42页 |
| 2 实时定量 PCR原理 | 第42-43页 |
| 2．1 实时定量 PCR技术中的几个关键概念 | 第42-43页 |
| 2．2 荧光标记 | 第43页 |
| 3 实时定量PCR的参照 | 第43-44页 |
| 4 实时定量 PCR方法 | 第44-45页 |
| 4．1 标准曲线法的相对定量 | 第44页 |
| 4．2 比较 Ct法的相对定量 | 第44-45页 |
| 4．3 标准曲线法的绝对定量 | 第45页 |
| 5 实时定量 PCR的应用 | 第45-47页 |
| 5．1 基因表达的研究 | 第45-46页 |
| 5．2 基因突变及其多态性 | 第46页 |
| 5．3 肿瘤研究 | 第46页 |
| 5．4 病原体测定 | 第46页 |
| 5．5 遗传病的诊断 | 第46-47页 |
| 6 存在的问题及应用前景 | 第47-48页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第48-68页 |
| 1 总技术路线 | 第48-49页 |
| 2 主要仪器 | 第49页 |
| 3 寻找候选基因的SNP | 第49-58页 |
| 3．1 实验材料 | 第49-50页 |
| 3．2 试剂及溶液配制 | 第50-51页 |
| 3．3 候选基因序列的获得和所用引物 | 第51-55页 |
| 3．4 实验方法与步骤 | 第55-58页 |
| 4 PCR-SSCP | 第58-61页 |
| 4．1 实验材料 | 第58-59页 |
| 4．2 所用引物 | 第59页 |
| 4．3 试剂及溶液配制 | 第59-60页 |
| 4．4 实验方法与步骤 | 第60-61页 |
| 5 候选基因的表达研究 | 第61-68页 |
| 5．1 实验器材准备 | 第61页 |
| 5．2 试剂及溶液配制 | 第61-62页 |
| 5．3 实验材料及其处理 | 第62-64页 |
| 5．4 候选基因表达研究所用引物 | 第64页 |
| 5．5 实验方法与步骤 | 第64-68页 |
| 第三部分 结果与讨论 | 第68-99页 |
| 1 候选基因趾型相关 SNPs的确定 | 第68-75页 |
| 1．1 鸡血DNA提取效果 | 第68页 |
| 1．2 候选基因外显子趾型相关SNPs | 第68-70页 |
| 1．3 候选基因内含子保守区趾型相关SNPs | 第70-71页 |
| 1．4 Lmbrl 5'上游区段趾型相关 SNPs | 第71-75页 |
| 1．5 小结 | 第75页 |
| 2 趾型相关 SNPs的SSCP筛查 | 第75-82页 |
| 2．1 PC12引物的SSCP结果 | 第75-76页 |
| 2．2 PC5引物SSCP结果与讨论 | 第76-78页 |
| 2．3 SNPs转录因子结合位点预测与讨论 | 第78-81页 |
| 2．4 Lmbr1与鸡多趾的关系讨论 | 第81页 |
| 2．5 小结 | 第81-82页 |
| 3 候选基因的表达研究 | 第82-97页 |
| 3．1 RNA提取效果 | 第82页 |
| 3．2 RT-PCR扩增子测序 | 第82-84页 |
| 3．3 RT-PCR结果 | 第84-86页 |
| 3．4 定量 PCR结果 | 第86-96页 |
| 3．5 Gli3、Lmbr1和 Shh的表达量与多趾讨论 | 第96页 |
| 3．6 小结 | 第96-97页 |
| 4 总结 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
| 附图 | 第109-123页 |
| 附表 | 第123-126页 |
| 作者简历 | 第126页 |