| 引言 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 第一部分 肺癌细胞系中FHIT基因和蛋白表达的研究 | 第9-28页 |
| 摘要 | 第8-12页 |
| ·前言 | 第12页 |
| ·材料 | 第12-14页 |
| ·细胞 | 第12-13页 |
| ·主要试剂 | 第13页 |
| ·培养基 | 第13页 |
| ·试剂溶液的配制 | 第13-14页 |
| ·主要仪器 | 第14页 |
| ·方法 | 第14-18页 |
| ·巢式RT-PCR检测几种细胞FHIT mRNA表达 | 第14-15页 |
| ·细胞总RNA提取 | 第14-15页 |
| ·RNA定量 | 第15页 |
| ·RNA电泳检测有无降解 | 第15页 |
| ·合成cDNA第一链 | 第15-16页 |
| ·巢式PCR扩增FHIT基因 | 第16页 |
| ·PCR产物纯化 | 第16-17页 |
| ·测序结果的同源性比对 | 第17页 |
| ·免疫细胞化学染色 | 第17-18页 |
| ·结果 | 第18-22页 |
| ·四种肺癌细胞系总RNA鉴定 | 第18页 |
| ·巢式RT-PCR检测四种肺癌细胞系的mRNA表达 | 第18-19页 |
| ·PCR产物纯化和测序 | 第19页 |
| ·免疫细胞化学染色检测四种肺癌细胞系FHIT蛋白的表达 | 第19-22页 |
| ·讨论 | 第22-25页 |
| ·参考文献 | 第25-27页 |
| ·附录 | 第27-28页 |
| 第二部分 在缺失FHIT基因的人肺腺癌细胞A_(549)中FHIT抑癌功能重建的体内外实验研究 | 第28-66页 |
| 摘要 | 第28-32页 |
| ·前言 | 第32页 |
| ·材料 | 第32-37页 |
| ·细胞系 | 第32页 |
| ·质粒 | 第32-33页 |
| ·主要试剂 | 第33-34页 |
| ·试剂溶液和培养基的配制 | 第34-36页 |
| ·主要仪器 | 第36-37页 |
| ·方法 | 第37-47页 |
| ·真核表达重组质粒PEGFP-FHIT的构建 | 第37-39页 |
| ·PCR扩增FHIT基因5-9外显子并引入Bgl Ⅱ和Sal Ⅰ酶切位点 | 第37页 |
| ·扩增的FHIT exon5-9 PCR产物乙醇精制 | 第37页 |
| ·乙醇精制的FHIT PCR产物纯化 | 第37-38页 |
| ·纯化的FHIT cDNA和PEGFP-N1载体酶切 | 第38页 |
| ·FHIT cDNA和载体PEGFP-N1连接 | 第38-39页 |
| ·转化 | 第39页 |
| ·制备感受态大肠杆菌 | 第39页 |
| ·重组质粒PEGFP-FHIT转化大肠杆菌 | 第39页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第39-41页 |
| ·提取质粒DNA | 第39-40页 |
| ·PCR扩增插入片段及酶切鉴定 | 第40-41页 |
| ·PCR扩增插入片段 | 第40页 |
| ·酶切 | 第40-41页 |
| ·DNA序列测定 | 第41页 |
| ·转染外源FHIT基因单克隆细胞系的建立 | 第41-44页 |
| ·PEOFP-FHIT和PEGFP-N1质粒DNA的提取和纯化 | 第41-42页 |
| ·选择压力药G418对A549细胞致死浓度实验 | 第42页 |
| ·Lipofectamine介导外源FHIT基因转染A549细胞 | 第42-43页 |
| ·细胞准备 | 第42-43页 |
| ·Lipofectamine介导外源基因转染A549细胞 | 第43页 |
| ·转染外源基因单克隆细胞系的建立 | 第43-44页 |
| ·转染外源基因单克隆细胞系的鉴定 | 第44-45页 |
| ·荧光显微镜下观察绿荧光蛋白GFP表达 | 第44页 |
| ·RT-PCR检测外源FHIT基因表达 | 第44页 |
| ·免疫细胞化学染色检测转染细胞FHIT蛋白表达 | 第44页 |
| ·Western Blot检测转染细胞中FHIT蛋白的表达 | 第44-45页 |
| ·细胞总蛋白的提取 | 第44页 |
| ·总蛋白的定量 | 第44-45页 |
| ·Western Blot检测FHIT蛋白的表达 | 第45页 |
| ·外源FHIT基因对A549细胞恶性增殖抑制的体内外实验研究 | 第45-46页 |
| ·母系及转染细胞系生长曲线的绘制 | 第45-46页 |
| ·母系及转染细胞系集落形成实验 | 第46页 |
| ·外源FHIT基因表达对A549细胞裸鼠体内成瘤性的影响 | 第46页 |
| ·流式细胞仪分析母系和转染细胞细胞周期和凋亡 | 第46页 |
| ·统计学处理 | 第46-47页 |
| ·结果 | 第47-58页 |
| ·真核表达载体PEGFP-FHIT的构建与鉴定 | 第47-49页 |
| ·选择压力药物G418对A549细胞致死浓度的测定 | 第49页 |
| ·外源FHIT基因转染细胞系的鉴定 | 第49-52页 |
| ·外源FHIT基因表达对体外培养A549细胞生长曲线及克隆形成能力的影响 | 第52-53页 |
| ·外源FHIT基因表达对A549细胞体内致瘤性的影响 | 第53-57页 |
| ·流式细胞仪分析母系及转染细胞的细胞周期和凋亡水平 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-62页 |
| ·结论 | 第62-63页 |
| ·参考文献 | 第63-65页 |
| ·附录 | 第65-66页 |
| 第三部分 外源FHIT基因对不同FHIT基因状态肺癌细胞系恶性增殖的影响及其机理的研究 | 第66-93页 |
| 摘要 | 第66-70页 |
| ·前言 | 第70页 |
| ·材料 | 第70-72页 |
| ·细胞 | 第70页 |
| ·主要试剂 | 第70-72页 |
| ·主要仪器 | 第72页 |
| ·方法 | 第72-74页 |
| ·转染外源FHIT基因细胞系的建立及鉴定 | 第72-73页 |
| ·转染细胞系的建立 | 第72-73页 |
| ·转染细胞系的鉴定 | 第73页 |
| ·荧光显微镜下观察GFP表达 | 第73页 |
| ·RT-PCR检测转染细胞mRNA表达 | 第73页 |
| ·免疫细胞化学染色和Western blot检测转染细胞FHIT蛋白表达 | 第73页 |
| ·转染细胞集落形成试验 | 第73-74页 |
| ·流式细胞仪分析细胞周期和凋亡 | 第74页 |
| ·Western blot检测801D、A2和A549细胞及其转染FHIT基因和空载体的细胞P21~(Waf／Cip)蛋白的表达 | 第74页 |
| ·统计学处理 | 第74页 |
| ·结果 | 第74-84页 |
| ·荧光显微镜下观察GFP表达 | 第74-76页 |
| ·转染细胞中FHIT mRNA表达 | 第76-78页 |
| ·母系及转染细胞FHIT蛋白表达结果 | 第78页 |
| ·外源FHIT基因对三种肺癌细胞系恶性生长的影响 | 第78-83页 |
| ·流式细胞分析仪分析母系及转染细胞的细胞周期利凋亡 | 第83页 |
| ·外源FHIT基因对三种肺癌细胞系P~(21WAF／Cip)蛋白表达的影响 | 第83-84页 |
| ·讨论 | 第84-89页 |
| ·结论 | 第89-90页 |
| ·参考文献 | 第90-93页 |
| FHIT基因研究进展(综述) | 第93-115页 |
| ·FHIT基因的克隆与结构 | 第93-94页 |
| ·FHIT基因编码的蛋白 | 第94-95页 |
| ·FHIT基因与肿瘤 | 第95-98页 |
| ·肺癌 | 第95-97页 |
| ·FHIT基因在肺癌中的异常 | 第95-96页 |
| ·FHIT基因与吸烟的关系 | 第96-97页 |
| ·FHIT基因作为肺癌预后分子标记的研究 | 第97页 |
| ·其它肿瘤 | 第97-98页 |
| ·FHIT基因与癌前病变 | 第98-101页 |
| ·FHIT基因的失活机制 | 第101-102页 |
| ·缺失及异常转录本 | 第101页 |
| ·FHIT基因5'CpG岛异常甲基化 | 第101-102页 |
| ·hMSH2基因与FHIT | 第102页 |
| ·FHIT基因体内外抑癌作用及抑癌机理研究 | 第102-106页 |
| ·FHIT基因与肿瘤的基因治疗和预防 | 第106页 |
| ·问题与展望 | 第106-108页 |
| ·参考文献 | 第108-115页 |
| 致谢 | 第115页 |
