| 1 引言 | 第1-26页 |
| ·草甘膦特性 | 第14页 |
| ·草甘膦的作用靶酶--EPSP合酶 | 第14-20页 |
| ·EPSP合酶的作用机理及草甘膦对该酶的抑制机理 | 第15-16页 |
| ·EPSP合酶及其编码基因研究进展 | 第16-20页 |
| ·草甘膦抗性获得途径 | 第20-23页 |
| ·EPSP合酶基因的应用 | 第23-24页 |
| ·抗草甘膦转基因植物的构建 | 第23页 |
| ·EPSP合酶基因的拆分转基因作物的安全性 | 第23-24页 |
| ·立题依据及研究内容 | 第24-26页 |
| 2 EPSP合酶抗性新基因的克隆 | 第26-39页 |
| ·材料 | 第27页 |
| ·菌株和质粒 | 第27页 |
| ·细菌的培养 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27页 |
| ·试剂 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-32页 |
| ·土壤总DNA基因组文库的构建 | 第27-31页 |
| ·筛选草甘膦抗性转化子 | 第31页 |
| ·目的菌株的草甘膦抗性分析 | 第31-32页 |
| ·目的菌株的EPSP合酶基因的获得 | 第32页 |
| ·测序结果的分析 | 第32页 |
| ·结果和分析 | 第32-38页 |
| ·土壤总DNA的获得 | 第32-33页 |
| ·土壤总DNA的部分酶切片段的获得 | 第33-34页 |
| ·重组载体文库的构建 | 第34页 |
| ·ERAM1菌株草甘膦抗性分析 | 第34-35页 |
| ·ERAM1菌株插入外源片段序列测定 | 第35-36页 |
| ·ERAM1-aroA基因是否为新基因的鉴定 | 第36-38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| 3 PCR随机突变鉴定EPSP合酶基因中抗性相关位点 | 第39-50页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·菌株和质粒 | 第40页 |
| ·培养基 | 第40页 |
| ·方法 | 第40-44页 |
| ·质粒DNA的提取-碱裂解法 | 第40页 |
| ·目的基因片段的错误倾向PCR突变扩增-使用毛细管PCR扩增仪 | 第40-41页 |
| ·重组质粒的构建 | 第41-43页 |
| ·突变株的筛选及草甘膦抗性分析 | 第43页 |
| ·突变株分子鉴定 | 第43-44页 |
| ·EPSP合酶突变基因的序列测定 | 第44页 |
| ·突变基因与野生型基因的比较及分析 | 第44页 |
| ·结果和分析 | 第44-49页 |
| ·PCR扩增产物 | 第44-45页 |
| ·重组质粒的构建和鉴定 | 第45页 |
| ·突变株的筛选及鉴定 | 第45-46页 |
| ·序列的测定及比较分析 | 第46-47页 |
| ·蛋白质二级结构的预测 | 第47-49页 |
| ·讨论 | 第49-50页 |
| 4 菌落直接PCR方法坚定EPSP合酶抗性相关位点 | 第50-62页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·菌株 | 第51页 |
| ·试剂 | 第51页 |
| ·培养基 | 第51页 |
| ·方法 | 第51-56页 |
| ·土壤样品的草甘膦含量的分析 | 第51页 |
| ·目的菌株的获得 | 第51-52页 |
| ·目的菌株的生理特性的研究 | 第52-53页 |
| ·目的菌株的EPSP合酶基因的获得 | 第53-55页 |
| ·目的菌株的分子生物学鉴定-16s rDNA序列的分析 | 第55-56页 |
| ·16s rDNA和EPSP合酶基因序列分析 | 第56页 |
| ·结果和分析 | 第56-61页 |
| ·土壤样品的草甘膦含量及其理性的分析 | 第56-57页 |
| ·目的菌株L35的获得 | 第57页 |
| ·L35菌株和G2菌株的草甘膦抗性分析比较 | 第57-58页 |
| ·L35菌株与G2菌株的抗生素抗性分析 | 第58页 |
| ·pH值对L35和G2菌的生长的影响 | 第58-59页 |
| ·L35菌株的16s rDNA的序列测定及结果分析 | 第59页 |
| ·L35菌株的EPSP合酶基因的序列测定及结果分析 | 第59-60页 |
| ·L35菌株EPSP合酶二级结构预测 | 第60-61页 |
| ·讨论 | 第61-62页 |
| 5 结论 | 第62-64页 |
| 6 参考文献 | 第64-69页 |
| 7 附录 | 第69-92页 |
| 附录1: AZ50的碱基和氨基酸序列 | 第69-70页 |
| 附录2: AZ100的碱基和氨基酸序列 | 第70-71页 |
| 附录3: ERL135未突变碱基及氨基酸序列 | 第71-72页 |
| 附录4: G2的EPSP合酶基因碱基和氨基酸序列 | 第72-73页 |
| 附录5: L35的碱基和氨基酸序列 | 第73-74页 |
| 附录6: ERAM1的完整的外源片段的碱基序列 | 第74-75页 |
| 附录7: ERAM1的EPSP合酶的碱基和氨基酸序列 | 第75-76页 |
| 附录8: ERAM1与ERL135中EPSP合酶基因碱基序列比较 | 第76-77页 |
| 附录9: ERAM1与G2中EPSP合酶基因碱基序列比较 | 第77-78页 |
| 附录10: ERAM1、ERL135和G2中EPSP合酶基因碱基序列比较 | 第78-79页 |
| 附录11: ERAM1与ERL135中EPSP合酶基因氨基酸序列比较 | 第79-80页 |
| 附录12: ERAM1与G2中EPSP合酶基因氨基酸序列比较 | 第80-81页 |
| 附录13: ERAM1、ERL135和G2中EPSP合酶基因氨基酸序列比较 | 第81-82页 |
| 附录14: 溶液的配置 | 第82-85页 |
| 附录15: 培养基的配置 | 第85-86页 |
| 附录16: 16S rRNA基因PCR引物 | 第86-88页 |
| 附录17: ERL135全基因的引物设计 | 第88-90页 |
| 附录18: G2菌株EPSP合酶基因的引物 | 第90-92页 |
| 8 在读期间发表的学术论文 | 第92-100页 |
| 9 作者简历 | 第100-101页 |
| 10 致谢 | 第101页 |
