| 前言 | 第1-10页 |
| 第一部分PPA-ELISA检测动物血清SARS病毒抗体 | 第10-23页 |
| 1.材料和方法 | 第10-15页 |
| ·材料 | 第10-11页 |
| ·动物样品的采集的地域与分布： | 第10页 |
| ·抗原与标准血清 | 第10页 |
| ·主要试剂 | 第10-11页 |
| ·主要设备 | 第11页 |
| ·主要溶液 | 第11页 |
| ·方法 | 第11-15页 |
| ·SPA与不同种动物血清中IgG结合力特性的研究 | 第11-12页 |
| ·包被 | 第11页 |
| ·洗涤 | 第11-12页 |
| ·封闭 | 第12页 |
| ·洗涤 | 第12页 |
| ·加SPA-HRP | 第12页 |
| ·显色 | 第12页 |
| ·测定OD值 | 第12页 |
| ·间接PPA-ELISA方法的建立 | 第12-13页 |
| ·待检血清的最佳稀释度的确定 | 第12页 |
| ·封闭液的选择 | 第12-13页 |
| ·SPA-HRP合适反应时间的确定 | 第13页 |
| ·抗原和抗体结合最佳反应时间的选择 | 第13页 |
| ·PPA-ELISA检测不同动物血清SARS病毒相关抗体的反应程序 | 第13-14页 |
| ·抗原的包被 | 第13页 |
| ·洗涤 | 第13页 |
| ·封闭 | 第13页 |
| ·洗涤 | 第13页 |
| ·抗原抗体反应 | 第13页 |
| ·加SPA-HRP | 第13-14页 |
| ·显色 | 第14页 |
| ·测定OD值 | 第14页 |
| ·临界值确定 | 第14页 |
| ·间接PPA-ELISA方法与冠状病毒(变异株)IgG抗体检测试剂盒(酶联免疫法)比较试验 | 第14-15页 |
| 2.结果 | 第15-20页 |
| ·各种动物血清中IgG与SPA的结合力的研 | 第15-17页 |
| ·PPA-ELISA工作条件的确定 | 第17-18页 |
| ·结果判定 | 第18-19页 |
| ·间接PPA-ELISA方法与冠状病毒(变异株)IgG抗体检测试剂盒(酶联免疫法)比较结果 | 第19-20页 |
| 3.讨论 | 第20-23页 |
| 第二部分 动物冠状病毒聚合酶基因的部分序列分析 | 第23-37页 |
| 1.材料与方法 | 第23-27页 |
| ·材料 | 第23-24页 |
| ·样品来源 | 第23页 |
| ·主要试剂与试剂盒 | 第23页 |
| ·引物的设计与合成 | 第23-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-27页 |
| ·总RNA的抽提 | 第24页 |
| ·反转录合成cDNA第一链 | 第24-25页 |
| ·巢式PCR | 第25-27页 |
| ·1％琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物 | 第27页 |
| ·PCR产物的回收 | 第27页 |
| ·PCR产物测序 | 第27页 |
| ·PPA-ELISA与RT-PCR检测结果的比较 | 第27页 |
| 2.结果 | 第27-36页 |
| ·11种动物146份样品冠状病毒聚合酶基因Nest-PCR检测结果 | 第27-34页 |
| ·构建系统发育树 | 第34页 |
| ·PPA-ELISA与RT-PCR检测比较结果 | 第34-36页 |
| 3.讨论 | 第36-37页 |
| 结论 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-41页 |
| 致谢 | 第41-42页 |
| 符号表 | 第42-44页 |
| 作者简历 | 第44-45页 |
| 在读期间著作、论文及重要技术报告登记 | 第45页 |
