| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-12页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 第一部分 材料与方法 | 第14-31页 |
| 1 材料 | 第14-16页 |
| ·材料及试剂 | 第14-15页 |
| ·供试对象 | 第14页 |
| ·试剂 | 第14-15页 |
| ·仪器 | 第15页 |
| ·凝胶及缓冲液配制 | 第15-16页 |
| 2 实验方法 | 第16-31页 |
| ·淡色库蚊CYP4家族新成员基因克隆及序列分析 | 第16-20页 |
| ·RNA提取、纯化与cDNA合成 | 第16-19页 |
| ·总RNA提取 | 第16-17页 |
| ·分离mRNA | 第17-18页 |
| ·反转录合成cDNA | 第18-19页 |
| ·引物合成 | 第19页 |
| ·目的片段的扩增与纯化 | 第19-20页 |
| ·目的片段的克隆、测序及分析 | 第20页 |
| ·淡色库蚊CYP4新序列与溴氰菊酯抗性关系的初步鉴定 | 第20-22页 |
| ·抽提RNA | 第20-21页 |
| ·半定量PCR | 第21-22页 |
| ·淡色库蚊CYP4E2r6基因的原核表达及鉴定 | 第22-31页 |
| ·实验整体设计 | 第22-24页 |
| ·引物设计 | 第24页 |
| ·基因克隆测序 | 第24-25页 |
| ·T／A克隆 | 第25页 |
| ·构建表达质粒 | 第25-27页 |
| ·酶切 | 第25-26页 |
| ·连接 | 第26-27页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第27页 |
| ·多克隆抗P450抗体的制备 | 第27-29页 |
| ·Western blotting初步鉴定 | 第29-31页 |
| 第二部分 结果 | 第31-40页 |
| 1 淡色库蚊CYP4家族新成员基因克隆及序列分析 | 第31-34页 |
| ·目的基因片段的扩增和克隆 | 第31页 |
| ·目的基因片段序列测定和分析 | 第31-33页 |
| ·蛋白质结构与功能预测 | 第33-34页 |
| 2 淡色库蚊CYP4新序列与溴氰菊酯抗性关系的初步鉴定 | 第34页 |
| 3 淡色库蚊CYP4E2r6基因的原核表达及鉴定 | 第34-40页 |
| ·PCR和T／A克隆 | 第34-36页 |
| ·表达载体构建和鉴定 | 第36-37页 |
| ·SDS-PAGE | 第37-38页 |
| ·Western Blotting | 第38页 |
| ·多克隆抗p450抗体Western Blotting检测蛋白表达 | 第38-40页 |
| 第三部分 讨论 | 第40-45页 |
| 1 淡色库蚊CYP4家族新成员基因克隆及序列分析 | 第40-41页 |
| 2 淡色库蚊CYP4新序列与溴氰菊酯抗性关系的初步鉴定 | 第41-42页 |
| 3 多克隆抗P450抗体的制备 | 第42-43页 |
| 4 淡色库蚊CYP4E2r6基因的原核表达及鉴定 | 第43-45页 |
| 小结 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 附录 | 第51-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 综述 | 第55-67页 |
