| 中文摘要 | 第1-15页 |
| 英文摘要 | 第15-18页 |
| 1 引言 | 第18-41页 |
| ·盐胁迫对植物的毒害作用 | 第18-20页 |
| ·盐胁迫对植物生长的影响 | 第18-19页 |
| ·盐胁迫对植物营养吸收的影响 | 第19页 |
| ·活性氧的产生 | 第19页 |
| ·对蛋白质功能和合成的影响 | 第19-20页 |
| ·Na+吸收机制研究进展 | 第20-23页 |
| ·K+通道 | 第21页 |
| ·NSCC 通道 | 第21-22页 |
| ·LCT 基因 | 第22页 |
| ·Na+的渗漏吸收机制 | 第22页 |
| ·植物中存在特异性 Na+吸收机制 | 第22页 |
| ·HKT 基因作用的复杂性 | 第22-23页 |
| ·Cl-的吸收机制 | 第23页 |
| ·盐胁迫信号的识别和传递 | 第23-30页 |
| ·盐胁迫信号的识别 | 第23-25页 |
| ·下游信号传递 | 第25-30页 |
| ·植物对 Na+胁迫的响应机制 | 第30-40页 |
| ·控制 Na+的运输 | 第30-31页 |
| ·Na+的木质部回流 | 第31-32页 |
| ·Na+的重新循环 | 第32-33页 |
| ·Na~+的外排 | 第33-34页 |
| ·Na~+向液泡的区域化 | 第34-36页 |
| ·合成细胞相容性物质 | 第36-38页 |
| ·清除活性氧的保护作用 | 第38-39页 |
| ·调节因子 | 第39页 |
| ·胁迫抵抗相关蛋白 | 第39-40页 |
| ·水孔蛋白 | 第40页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第40-41页 |
| 2 材料和方法 | 第41-54页 |
| ·实验材料 | 第41页 |
| ·菌株 | 第41页 |
| ·质粒 | 第41页 |
| ·酶及生化试剂 | 第41页 |
| ·植物材料 | 第41页 |
| ·基因的拼接 | 第41-43页 |
| ·基因融合引物 | 第41-42页 |
| ·基因融合方法 | 第42页 |
| ·SOEing PCR 扩增产物的回收 | 第42页 |
| ·SOEing PCR 扩增产物的酶切 | 第42页 |
| ·DNA 片段的连接 | 第42页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第42页 |
| ·融合 cNHX1 基因的鉴定 | 第42页 |
| ·融合 cNHX1 基因的序列测定 | 第42页 |
| ·融合 cNHX1 基因的修复 | 第42-43页 |
| ·cNHX1 基因的序列分析 | 第43页 |
| ·cNHX1 基因酵母表达载体的构建 | 第43-44页 |
| ·pUCNHX 克隆载体的构建和鉴定 | 第43页 |
| ·pUGNHX 载体的构建 | 第43-44页 |
| ·酿酒酵母的转化和鉴定 | 第44-45页 |
| ·酿酒酵母的电激转化 | 第44页 |
| ·酵母转化子的鉴定 | 第44-45页 |
| ·cNHX1基因在酵母细胞中的定位 | 第45页 |
| ·cNHX1基因功能的鉴定 | 第45-46页 |
| ·Drop assay | 第45页 |
| ·NaCl对酵母生长曲线的影响 | 第45页 |
| ·离子含量的测定 | 第45-46页 |
| ·PCD 抑制效应实验 | 第46-47页 |
| ·PCD 抑制效应的荧光显微镜观察(DAPI 染色法) | 第46页 |
| ·细胞核碎裂比率统计 | 第46页 |
| ·Clonigenic survival assay(CFU) | 第46页 |
| ·酵母细胞凋亡的流式细胞分析(PI 染色法) | 第46-47页 |
| ·cNHX1 基因转化‘弗吉尼亚’草莓 | 第47-50页 |
| ·cNHX1 基因植物表达载体(pRNHX)的构建 | 第47页 |
| ·cNHX1 基因植物转化工程菌的获得 | 第47-48页 |
| ·草莓转化 | 第48页 |
| ·转化植株的分子鉴定 | 第48-49页 |
| ·转基因草莓植株的 RT-PCR 检测 | 第49-50页 |
| ·转基因植物 cNHX1 基因表达量和拷贝数的荧光定量 PCR 检测 | 第50-52页 |
| ·引物设计和评价 | 第50-51页 |
| ·PCR反应体系退火温度的优化 | 第51页 |
| ·PCR 反应体系 Mg2+浓度的优化 | 第51页 |
| ·cDNA 稀释浓度的确定 | 第51页 |
| ·荧光定量PCR实验方法 | 第51页 |
| ·标准曲线和熔解曲线的制作 | 第51页 |
| ·cNHX1 基因表达量的定量分析 | 第51页 |
| ·转基因拷贝数的荧光定量分析 | 第51-52页 |
| ·转基因植株的 Southern blot 检测 | 第52页 |
| ·转基因植株部分生理指标的分析 | 第52-54页 |
| ·K+ 、Na + 和Cl-含量测定 | 第52-53页 |
| ·MDA 含量的测定 | 第53页 |
| ·可溶性蛋白含量的测定 | 第53页 |
| ·Pro 含量的分析 | 第53-54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-89页 |
| ·cNHX1基因的融合 | 第54-57页 |
| ·cNHX1片段的融合 | 第54-55页 |
| ·SOEing PCR 产物的克隆和酶切鉴定 | 第55页 |
| ·融合 cNHX1 基因的序列测定 | 第55-56页 |
| ·融合 cNHX1 基因的序列的修复 | 第56-57页 |
| ·cNHX1 基因的序列分析 | 第57-60页 |
| ·cNHX1 基因的功能结构域预测 | 第57-58页 |
| ·cNHX1 基因的跨膜区域预测 | 第58页 |
| ·cNHX1 基因的同源比较分析 | 第58-60页 |
| ·cNHX1 基因的系统发生分析 | 第60页 |
| ·cNHX1 基因离子区域化功能的鉴定 | 第60-74页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第60-61页 |
| ·酵母转化 | 第61-62页 |
| ·酵母转化子的鉴定 | 第62-63页 |
| ·cNHX1 蛋白的细胞定位 | 第63-65页 |
| ·cNHX1 基因离子区域化功能的鉴定 | 第65-68页 |
| ·cNHX1 基因对高盐诱导的酵母细胞程序性死亡的抑制作用 | 第68-74页 |
| ·转 cNHX1 基因草莓植株的获得 | 第74-76页 |
| ·含 cNHX1 基因植物双元表达载体的构建 | 第74页 |
| ·三亲交配 | 第74页 |
| ·草莓植株的转化和转化苗的获得 | 第74-76页 |
| ·利用 Real Time PCR 分析转基因植株拷贝数和表达量 | 第76-83页 |
| ·RNA 的提取 | 第76页 |
| ·定量 PCR 引物的设计及评价 | 第76-77页 |
| ·PCR 反应体系的优化 | 第77页 |
| ·Mg2+浓度的优化 | 第77-78页 |
| ·cDNA 稀释浓度的确定 | 第78-79页 |
| ·熔解曲线分析? | 第79-80页 |
| ·标准曲线的制作 | 第80-81页 |
| ·转cNHX1基因草莓植株cNHX1基因表达水平的定量分析 | 第81-83页 |
| ·转基因植株cNHX1基因拷贝数的定量分析 | 第83-86页 |
| ·标准曲线的制作 | 第83-84页 |
| ·转 cNHX1 基因草莓植株 cNHX1 基因表达水平的定量 | 第84-85页 |
| ·Southern 杂交 | 第85-86页 |
| ·转基因草莓植株部分生理指标的分析 | 第86-89页 |
| ·盐胁迫条件下 Na+,K+和 Cl-含量分析 | 第86页 |
| ·盐胁迫条件下 Pro 含量分析 | 第86页 |
| ·盐胁迫条件下蛋白质含量分析 | 第86页 |
| ·MDA 含量分析 | 第86-89页 |
| 4 讨 论 | 第89-98页 |
| ·cNHX1 基因的融合 | 第89页 |
| ·cNHX1 蛋白的定位 | 第89-90页 |
| ·cNHX1 蛋白的 Topology 模型 | 第90页 |
| ·cNHX1 基因的离子区域化功能和底物特异性 | 第90-91页 |
| ·cNHX1 基因的 PCD 抑制作用 | 第91-92页 |
| ·cNHX1 基因对植物 PCD 的可能影响 | 第92-93页 |
| ·定量分析转基因草莓外源基因表达水平 | 第93-95页 |
| ·Real Time PCR 体系的可靠性 | 第93-94页 |
| ·外源基因表达的定量分析 | 第94-95页 |
| ·外源基因拷贝数的定量分析 | 第95-96页 |
| ·转基因草莓的耐盐能力 | 第96-98页 |
| 5 结 论 | 第98-100页 |
| ·cNHX1 基因是 AtNHX 1 和 2 的同源基因 | 第98页 |
| ·cNHX1 基因定位于液泡膜 | 第98页 |
| ·cNHX1 基因具有 Na+/H+ antiporter 活性 | 第98页 |
| ·cNHX1 蛋白抑制了 NaCl 诱导的酵母细胞程序性死亡 | 第98页 |
| ·不同转基因株系 cNHX1 基因表达水平和拷贝数存在差异 | 第98-99页 |
| ·转 cNHX1 基因草莓植株提高了耐盐能力 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-122页 |
