| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要:亮氨酰-tRNA合成酶和tRNALeu的相互作用 | 第7-10页 |
| ABSTRACT:The interaction between leucyl-tRNAsynthetase and tRNALeu | 第10-13页 |
| 第一部分 大肠杆菌亮氨酰-tRNA 合成酶的研究 | 第13-62页 |
| 第一章 大肠杆菌亮氨酰-tRNA 合成酶 T252 上的侧链基团对氨基酸底物的识别及细胞生存是重要的 | 第13-39页 |
| 摘要 | 第13页 |
| 关键词 | 第13-14页 |
| 1 引言 | 第14-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-23页 |
| ·材料 | 第19页 |
| ·突变体 LeuRS 基因的构建，表达和纯化 | 第19-20页 |
| ·氨酰化测定 | 第20-21页 |
| ·编校反应中 ATP 消耗的测定 | 第21-22页 |
| ·同位素标记的氨基酰化产物的制备和去氨基酰化 | 第22页 |
| ·大肠杆菌 LeuRS 和突变体体内的补偿实验 | 第22-23页 |
| ·生长曲线测定 | 第23页 |
| ·测定高浓度外源 a-氨基丁酸(Abu)对 KL231 转化子的影响 | 第23页 |
| 3 结果 | 第23-32页 |
| ·酶基因的表达与酶的纯化 | 第23-24页 |
| ·LeuRS 变种酶活力变化及稳态动力学常数 | 第24-25页 |
| ·T252 替换对 E. coli LeuRS 编校活力的影响 | 第25-29页 |
| ·大肠杆菌 LeuRS 和突变体酶对 KL231 的拯救 | 第29-31页 |
| ·α-氨基丁酸(Abu)对细胞的毒性实验 | 第31-32页 |
| 4 讨论 | 第32-36页 |
| 参考文献 | 第36-39页 |
| 第二章 tRNALeu 接受茎末端变动对大肠杆菌亮氨酰-tRNA 合成酶的亮氨酰化和编校活性的影响 | 第39-62页 |
| 摘要 | 第39-40页 |
| 关键词 | 第40页 |
| 1 引言 | 第40-43页 |
| 2 材料和方法 | 第43-45页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·RNA 底物制备 | 第43-44页 |
| ·氨基酰化测定 | 第44-45页 |
| ·编校反应中的 ATP 消耗的测定 | 第45页 |
| 3 结果 | 第45-55页 |
| ·RNA 底物设计和构建 | 第45-46页 |
| ·tRNALeu 接受茎末端去稳定化对 E. coli LeuRS 氨基酰化和编校反应的影响 | 第46-52页 |
| ·E. coli tRNALeu 3' 末端变动对氨基酰化和编校功能的影响 | 第52-55页 |
| 4 讨论 | 第55-59页 |
| 参考文献 | 第59-62页 |
| 第二部分 超耐热菌 Aquifex aeolicus 亮氨酰-tRNA 合成酶的研究 | 第62-119页 |
| 第三章 超耐热菌 Aquifex aeolicus 亮氨酰-tRNA 合成酶与 tRNA 的相互作用 | 第62-79页 |
| 摘要 | 第62页 |
| 关键词 | 第62-63页 |
| 1 引言 | 第63-65页 |
| 2 材料和方法 | 第65-69页 |
| ·材料 | 第65页 |
| ·体外转录 A. aeolicus tRNALeu的制备 | 第65-67页 |
| ·A. aeolicus LeuRS 的β亚基结合核酸实验 | 第67页 |
| ·β亚基与 tRNA 间形成的复合物的分子量测定 | 第67页 |
| ·酶活性测定 | 第67-68页 |
| ·αβ-LeuRS 亮氨酰化活性位点滴定 | 第68-69页 |
| 3 结果 | 第69-73页 |
| ·β亚基结合 tRNA | 第69-71页 |
| ·HPLC 验证β亚基:tRNA 复合物的构成 | 第71-72页 |
| ·αβ-LeuRS 只有一个氨基酰化活性位点 | 第72-73页 |
| 4 讨论 | 第73-76页 |
| 参考文献 | 第76-79页 |
| 第四章 超耐热菌 Aquifex aeolicus 亮氨酰-tRNA 合成酶氨基酰化小螺旋(minihelices)的研究 | 第79-119页 |
| 摘要 | 第79-80页 |
| 关键词 | 第80页 |
| 1 引言 | 第80-84页 |
| 2 材料和方法 | 第84-88页 |
| ·材料 | 第84-85页 |
| ·RNA 底物制备 | 第85-86页 |
| ·RNA 熔点(Melting Temperature，Tm)的测定 | 第86-87页 |
| ·亮氨酰化和误氨基酰化反应的测定 | 第87-88页 |
| ·编校反应中 ATP 消耗的测定 | 第88页 |
| 3 结果 | 第88-105页 |
| ·RNA 底物设计和构建 | 第88-90页 |
| ·古老的αβ-LeuRS 可以亮氨酰化小螺旋 | 第90-92页 |
| ·小螺旋第一对碱基对的去稳定化提高氨基酰化水平 | 第92-94页 |
| ·反应温度对小螺旋氨基酰化的影响 | 第94-96页 |
| ·小螺旋的氨基酰化依赖于 A73 位决定子 | 第96-98页 |
| ·其它 RNA 螺旋的加入对小螺旋氨基酰化的影响 | 第98-100页 |
| ·αβ-LeuRS 的亮氨酸专一性结构域可能参与了对小螺旋的识别 | 第100-102页 |
| ·不依赖 tRNA 的转移前编校阻止了小螺旋的误氨基酰化 | 第102-105页 |
| 4 讨论 | 第105-111页 |
| 参考文献 | 第111-119页 |
| 结论 | 第119-121页 |
| 附录:本论文缩写汇编 | 第121-124页 |
| 在学期间论文发表、会议报告、和获奖目录 | 第124-126页 |
| 致谢 | 第126页 |
