| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-9页 |
| 英文缩写表 | 第9-10页 |
| 第一部分 文献综述 | 第10-23页 |
| 有机磷农药残留的检测与降解 | 第10页 |
| 1 有机磷农药残留测定方法 | 第10-15页 |
| 2 建立农药物质降解的生物反应器 | 第15-23页 |
| 第二部分 实验 | 第23-58页 |
| 引言 | 第23-25页 |
| 材料与方法 | 第25-34页 |
| 1 材料 | 第25-27页 |
| 1．1 菌株与质粒 | 第25页 |
| 1．2 试剂与材料 | 第25-26页 |
| 1．3 分子量标准 | 第26页 |
| 1．4 设备与仪器 | 第26页 |
| 1．5 培养基与缓冲液 | 第26-27页 |
| 1．5．1 培养基 | 第26页 |
| 1．5．2 缓冲液 | 第26-27页 |
| 2 实验方法 | 第27-34页 |
| 2．1 甲基对硫磷水解酶在异源宿主中的表达及性质研究 | 第27-32页 |
| 2．1．1 mph基因的PCR扩增及表达载体构建 | 第27-28页 |
| 2．1．2 MPH的培养与粗酶的获得 | 第28-29页 |
| 2．1．3 以金属螯合层析纯化THMPA | 第29-30页 |
| 2．1．4 THMPA酶学性质研究 | 第30-32页 |
| 2．1．4．1 酶活性测定体系 | 第30页 |
| 2．1．4．2 酶动力学参数测定 | 第30-31页 |
| 2．1．4．3 理化因素对THMPA活性影响 | 第31页 |
| 2．1．4．4 THMPB，MPA，MPB的活性鉴定 | 第31页 |
| 2．1．4．5 肠激酶切割实验 | 第31-32页 |
| 2．1．4．6 BCA法测定蛋白质浓度 | 第32页 |
| 2．2 重组酶检测痕量农药方法的建立 | 第32页 |
| 2．3 重组酶THMPA的体外分子进化 | 第32-34页 |
| 2．3．1 以Error prone PCR获得突变基因文库 | 第32页 |
| 2．3．2 突变文库的构建和筛选 | 第32-34页 |
| 结果与分析 | 第34-53页 |
| 1 甲基对硫磷水解酶的异源宿主表达与目的蛋白纯化 | 第34-39页 |
| 1．1 目的基因的克隆及表达载体的构建 | 第34-36页 |
| 1．2 目的蛋白的表达及纯化 | 第36-39页 |
| 1．2．1 表达条件的优化 | 第36-37页 |
| 1．2．2 THMPA在细胞的分布 | 第37-38页 |
| 1．2．3 目的蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| 2 重组酶功能鉴定及分析 | 第39-45页 |
| 2．1 酶的活性分析 | 第39-40页 |
| 2．2 蛋白浓度测定及比活力的计算 | 第40页 |
| 2．3 动力学参数分析 | 第40-41页 |
| 2．4 重组酶对乙基对硫磷水解活性提高原因的探索 | 第41-45页 |
| 2．4．1 不同组合系统下甲基对硫磷水解酶活性的比较 | 第41-42页 |
| 2．4．2 THMPA经肠激酶切割后的酶活性比较 | 第42-45页 |
| 3 理化因素对重组酶THMPA与野生酶MPH影响的比较 | 第45-48页 |
| 3．1 酶反应的最适温度 | 第45-46页 |
| 3．2 酶反应的最适pH值 | 第46页 |
| 3．3 酶的稳定性 | 第46-47页 |
| 3．4 酶对热的稳定性 | 第47页 |
| 3．5 金属离子对THMPA的影响 | 第47-48页 |
| 4 以THMPA为基础的痕量农药检测系统的建立 | 第48-50页 |
| 5 基于AD494（DE3）/pET32a（+）-mph系统的MPH的体外定向子进化试验设计和突变文库的筛选 | 第50-53页 |
| 5．1 AD494（DE3）/pET32a（+）-mph系统的MPH的体外定向子进化试验设计 | 第50页 |
| 5．2 引物设计及酶切位点的选用 | 第50-51页 |
| 5．3 建立筛选文库 | 第51-52页 |
| 5．4 筛选提高水解活力的突变子 | 第52-53页 |
| 5．5 Error prone PCR的条件优化 | 第53页 |
| 小结 | 第53-55页 |
| 讨论 | 第55-57页 |
| 1 硫氧还蛋白的“分子伴侣”作用 | 第55页 |
| 2 发展AD494（DE3）/pET32a（+）-mph系统成为一种方便的生物降解反应器 | 第55-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-66页 |
| 发表和待发表文章目录 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
