中文摘要 | 第1-10页 |
英文摘要 | 第10-12页 |
英文符号、缩略语及其说明 | 第12-14页 |
第一部分 文献综述 | 第14-29页 |
第二部分 研究论文 | 第29页 |
前言 | 第29-31页 |
第一章 小麦紫黄质脱环氧化酶基因的克隆 | 第31-53页 |
1 材料与方法 | 第31-37页 |
1.1 实验材料 | 第31-32页 |
1.2 试验方法 | 第32-37页 |
1.2.1 总RNA的提取 | 第32-33页 |
1.2.2 反转录CDNA第一条链的合成 | 第33页 |
1.2.3 目的基因CDNA片段的分离 | 第33-36页 |
1.2.4 目的基因3’末端片段的分离 | 第36-37页 |
1.2.5 目的基因5’端片段的分离 | 第37页 |
2 结果与分析 | 第37-51页 |
2.1 小麦总RNA的提取 | 第37页 |
2.2 小麦VDE基因的克隆 | 第37-51页 |
2.2.1 小麦VDE基因中间片段的克隆 | 第38-39页 |
2.2.2 小麦VDE基因3’端片段的克隆 | 第39-42页 |
2.2.3 小麦VDE基因5端片段的克隆 | 第42-43页 |
2.2.4 小麦VDE基因的全系列 | 第43-45页 |
2.2.5 小麦VDE基因的生化特征 | 第45-48页 |
2.2.6 VDE基因的同源性比较 | 第48-51页 |
3 讨论 | 第51-53页 |
第二章 反义WVDE基因表达载体的构建和烟草的转化 | 第53-63页 |
1 材料与方法 | 第53-59页 |
1.1 材料 | 第53页 |
1.1.1 植物材料 | 第53页 |
1.1.2 菌株与质粒 | 第53页 |
1.1.3 酶及生化试剂 | 第53页 |
1.1.4 PCR引物 | 第53页 |
1.2 试验方法 | 第53-56页 |
1.2.1 反义WVDE基因表达载体的构建 | 第53-55页 |
·根癌农杆菌LBA4404感受态细胞的制备、转化 | 第55页 |
1.2.3 感受态细胞的制备 | 第55页 |
1.2.4 冻融法转化农杆菌 | 第55-56页 |
1.2.5 农杆菌介导转化烟草 | 第56页 |
1.3 转基因烟草的分子鉴定 | 第56-59页 |
1.3.1 烟草基因组DNA的提取 | 第56-57页 |
1.3.2 转基因植株的PCR鉴定 | 第57-58页 |
1.3.3 SOUTHERN杂交分析 | 第58-59页 |
2 结果与分析 | 第59-62页 |
2.1 表达载体的构建 | 第59页 |
2.2 烟草的转化情况 | 第59-60页 |
2.3 转基因烟草的RT-PCR检测 | 第60-61页 |
2.4 转基因烟草的Southern分析 | 第61-62页 |
3 讨论 | 第62-63页 |
第三章 小麦和转基因烟草VDE的表达研究 | 第63-80页 |
1 材料与方法 | 第63-64页 |
1.1 实验材料 | 第63页 |
1.1.1 植物材料 | 第63页 |
1.1.2 菌株与质粒 | 第63页 |
1.1.3 酶及生化试剂 | 第63页 |
1.1.4 PCR引物 | 第63页 |
1.2 实验方法 | 第63-64页 |
1.2.1 荧光参数的测定 | 第63-64页 |
1.2.2 叶黄素组分的测定 | 第64页 |
1.2.3 PCR-SOUTHERN杂交分析 | 第64页 |
2 结果与分析 | 第64-74页 |
2.1 小麦WVDE表达的日变化 | 第64-68页 |
2.1.1 小麦WVDERT-PCRSOUTHERN检测 | 第65页 |
2.1.2 小麦叶片的荧光参数的变化 | 第65-67页 |
2.1.3 小麦叶片中叶黄素循环脱环氧化状态的变化 | 第67-68页 |
2.2 转基因烟草荧光参数的变化 | 第68-74页 |
2.2.1 低温条件下转基因烟草荧光参数的变化 | 第68-70页 |
2.2.2 强光条件下转基因烟草荧光参数的变化 | 第70页 |
2.2.3 盐胁迫下转基因烟草中荧光参数的变化 | 第70-72页 |
2.2.4 转基因烟草中荧光参数的日变化 | 第72-74页 |
3 讨论 | 第74-78页 |
4 结论 | 第78-79页 |
5 下一步的工作设想 | 第79-80页 |
参考文献 | 第80-95页 |
附录 | 第95-97页 |
致谢 | 第97-98页 |