| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 1 文献综述---DNA改组技术和体外分子进化 | 第10-28页 |
| ·引言 | 第10页 |
| ·DNA改组技术的原理 | 第10-11页 |
| ·DNA改组概念上的拓展 | 第11-13页 |
| ·从单基因改组到基因家族改组 | 第11-12页 |
| ·DNA改组与分子育种 | 第12页 |
| ·基因组改组 | 第12-13页 |
| ·DNA改组技术的演变 | 第13-17页 |
| ·交错延伸重组 | 第13-15页 |
| ·随机引物体外重组 | 第15页 |
| ·过渡模板随机嵌合生长重组 | 第15-16页 |
| ·不依赖序列同源性的重组 | 第16-17页 |
| ·酵母增强组合文库 | 第17页 |
| ·DNA改组技术上的完善和成熟 | 第17-19页 |
| ·突变频率的控制 | 第17-18页 |
| ·增加重组效率 | 第18-19页 |
| ·模型的建立 | 第19页 |
| ·DNA改组技术相关的筛选方案 | 第19-22页 |
| ·噬菌体展示技术 | 第20页 |
| ·细菌表面展示技术 | 第20-21页 |
| ·酵母表面展示系统研究 | 第21页 |
| ·核糖体展示技术和mRNA展示技术 | 第21-22页 |
| ·DNA改组的应用 | 第22-25页 |
| ·基础研究方面的应用 | 第22-23页 |
| ·应用研究方面的成果 | 第23-25页 |
| ·小结与展望 | 第25-28页 |
| 2 本实验目的和意义 | 第28-29页 |
| 3 材料和方法 | 第29-42页 |
| ·质粒和菌株 | 第29页 |
| ·酶及生化试剂 | 第29页 |
| ·引物设计 | 第29页 |
| ·溶液及培养基 | 第29-32页 |
| ·方法 | 第32-42页 |
| ·小量制备质粒DNA | 第32-33页 |
| ·大量制备质粒DNA | 第33页 |
| ·测序用DNA模板的醋酸氨纯化 | 第33-34页 |
| ·DNA凝胶电泳 | 第34-35页 |
| ·DNA的回收 | 第35-36页 |
| ·电击法感受态的制备及电击转化 | 第36页 |
| ·氯化钙化学法制备大肠杆菌感受态细胞及化学法转化 | 第36-37页 |
| ·酶切反应 | 第37页 |
| ·质粒建库连接反应 | 第37-38页 |
| ·DNA改组程序 | 第38-39页 |
| ·cI突变库的构建、分析及筛选 | 第39页 |
| ·半乳糖苷酶活性测试 | 第39-40页 |
| ·质粒的DNA序列测定 | 第40-42页 |
| 4 结果和分析 | 第42-55页 |
| ·筛选用表达载体的构建 | 第42-43页 |
| ·野生型cI以及cIts857基因的克隆 | 第43页 |
| ·DNA改组cI基因 | 第43-47页 |
| ·从质粒yf4602-cI中用普通Taq酶进行PCR反应 | 第43-45页 |
| ·DNaseI降解 | 第45页 |
| ·无引物重聚PCR反应 | 第45-47页 |
| ·有引物PCR扩增 | 第47页 |
| ·突变库的构建及库容估算 | 第47页 |
| ·突变库的筛选过程 | 第47-48页 |
| ·半乳糖苷酶活性的测定 | 第48-49页 |
| ·DNA序列的测定和分析 | 第49-55页 |
| 5 讨论 | 第55-59页 |
| ·CI／P_L、P_R表达系统 | 第55页 |
| ·定向进化和理性设计之间的选择 | 第55-56页 |
| ·筛选的策略问题 | 第56-57页 |
| ·DNA改组技术相关问题 | 第57-58页 |
| ·DNA改组过程中的突变率 | 第57页 |
| ·DNA改组过程中遇到的困难 | 第57-58页 |
| ·温敏蛋白突变体 | 第58页 |
| ·今后继续工作的方向 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 附录 | 第64-72页 |
| 致谢 | 第72页 |