杏鲍菇遗传转化体系的建立与pyrG基因的克隆
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 引言 | 第9-15页 |
| ·杏鲍菇概述 | 第9页 |
| ·真菌遗传转化现状 | 第9-11页 |
| ·本研究所用转化方法、启动子 | 第11-12页 |
| ·本研究所用转化方法 | 第11页 |
| ·本研究所用的启动子 | 第11-12页 |
| ·本研究涉及的筛选标记 | 第12-13页 |
| ·潮霉素抗性标记 | 第12页 |
| ·营养缺陷型标记 | 第12-13页 |
| ·本研究所用的报告基因绿色荧光蛋白基因 | 第13-14页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第14-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-37页 |
| ·材料 | 第15-17页 |
| ·菌株 | 第15页 |
| ·质粒 | 第15页 |
| ·主要化学试剂及试剂盒 | 第15-16页 |
| ·主要仪器设备 | 第16-17页 |
| ·方法 | 第17-37页 |
| ·培养基的配制 | 第17页 |
| ·主要试剂的配制 | 第17-18页 |
| ·杏鲍菇对潮霉素抗性试验 | 第18-19页 |
| ·杏鲍菇gpd 启动子和终止子的克隆 | 第19-23页 |
| ·杏鲍菇表达载体的构建 | 第23-25页 |
| ·杏鲍菇原生质体转化 | 第25-27页 |
| ·杏鲍菇转化子PCR 鉴定 | 第27-28页 |
| ·RT-PCR 扩增及实时荧光定量PCR 分析 | 第28-30页 |
| ·Southern blot 杂交 | 第30-32页 |
| ·荧光显微镜观察 | 第32页 |
| ·出菇试验 | 第32页 |
| ·杏鲍菇pyrG 基因的克隆 | 第32-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-57页 |
| ·杏鲍菇对潮霉素最敏感浓度测定 | 第37-39页 |
| ·杏鲍菇单核菌株的获得 | 第37-38页 |
| ·杏鲍菇对潮霉素最敏感浓度测定 | 第38-39页 |
| ·杏鲍菇gpd 启动子与终止子的扩增与序列分析 | 第39-41页 |
| ·杏鲍菇基因组DNA 检测 | 第39页 |
| ·杏鲍菇gpd 启动子与终止子的PCR 扩增 | 第39-40页 |
| ·杏鲍菇gpd 启动子序列分析 | 第40-41页 |
| ·杏鲍菇重组表达载体构建 | 第41-43页 |
| ·重组质粒PCR 验证 | 第41-42页 |
| ·重组质粒酶切验证 | 第42-43页 |
| ·杏鲍菇原生质体转化 | 第43-44页 |
| ·杏鲍菇转化子鉴定 | 第44-50页 |
| ·转化子PCR 与RT-PCR 验证 | 第44页 |
| ·转化子Real-time 荧光定量PCR 分析 | 第44-47页 |
| ·转化子Southern blot 验证 | 第47-49页 |
| ·荧光显微镜观察 | 第49-50页 |
| ·杏鲍菇转化子出菇 | 第50-51页 |
| ·杏鲍菇pyrG 基因的克隆 | 第51-57页 |
| ·pyrG 基因的巢式PCR 扩增 | 第51页 |
| ·染色体步行技术获得pyrG 基因上下游序列 | 第51-52页 |
| ·pyrG 基因全长序列分析 | 第52-55页 |
| ·pyrG 基因PCR 验证 | 第55-56页 |
| ·系统发育树的构建 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-62页 |
| ·表达载体的选择 | 第57-58页 |
| ·原生质体制备及转化分析 | 第58-60页 |
| ·转化菌株的生物学分析 | 第60页 |
| ·转基因生物安全问题 | 第60-62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 附录 | 第68-72页 |
| 在校期间发表的学术论文 | 第72-73页 |
| 作者简历 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
