| 一、 中文摘要 | 第1-6页 |
| 二、 英文摘要 | 第6-8页 |
| 三、 前言 | 第8-11页 |
| 四、 实验材料 | 第11-13页 |
| 五、 实验方法 | 第13-22页 |
| 六、 实验结果 | 第22-52页 |
| （一） 基于ES细胞的基因打靶 | 第22-43页 |
| 1． 针对小鼠基因组HPRT位点的置换型打靶载体的构建 | 第22-29页 |
| （1） 重组酶识别位点变异体序列的设计、合成和克隆 | 第22-23页 |
| （2） 置换型打靶载体pSP-HPRT-F-Neo-F3的构建 | 第23页 |
| （3） 置换型打靶载体pSP-HPRT-lox66-Neo的构建 | 第23-29页 |
| 2． 小鼠胚胎干细胞体外掊养和观察 | 第29页 |
| 3． 小鼠胚胎干细胞的基因转移和药物筛选 | 第29-36页 |
| 4． 重组子的分子鉴定 | 第36-43页 |
| （二） 基于ES细胞HPRT位点的F1p重组酶介导的盒式交换研究 | 第43-52页 |
| 1． Flp重组酶介导的盒式交换和“通用型交换质粒”pF-Neo-F3的设计和构建策略 | 第43-45页 |
| 2． 交换质粒pF-HPRT-F3的构建和鉴定 | 第45页 |
| 3． Flp表达质粒的构建和鉴定 | 第45页 |
| 4． 电穿孔基因转移和药物筛选 | 第45-49页 |
| 5． 盒式交换重组子鉴定 | 第49-52页 |
| 七、 讨论 | 第52-62页 |
| 1、 基于小鼠HPRT位点的置换型打靶载体的结构和重组效率 | 第52-54页 |
| 2、 ES细胞的特性和体外培养 | 第54-56页 |
| 3、 ES细胞的基因转移和药物筛选 | 第56-57页 |
| 4、 基因打靶重组子分子鉴定的策略 | 第57-58页 |
| 5、 置换型载体在ES细胞中的整合方式与双交换效率 | 第58-59页 |
| 6、 影响重组酶介导的盒式交换的因素和提高效率的策略 | 第59-62页 |
| 八、 研究工作小结 | 第62-64页 |
| 九、 参考文献 | 第64-67页 |
| 十、 文献综述 | 第67-118页 |
| 十一、 附录 | 第118-128页 |
| 致谢 | 第128页 |
