英文缩写 | 第1-7页 |
中文摘要 | 第7-9页 |
英文摘要 | 第9-12页 |
前言 | 第12-15页 |
实验材料 | 第15-21页 |
一、工具酶 | 第15页 |
二、细胞培养及转染试剂 | 第15页 |
三、主要生化试剂 | 第15页 |
四、菌株 | 第15页 |
五、细胞株 | 第15页 |
六、质粒 | 第15-16页 |
七、主要仪器设备 | 第16-21页 |
实验方法 | 第21-28页 |
一、荧光素酶报告质粒pGL2-PEPCK-luc的构建及鉴定 | 第21-25页 |
1.质粒DNA的碱法小量制备 | 第21-22页 |
2.质粒DNA的大量制备 | 第22页 |
3.质粒的纯化 | 第22-23页 |
4.DNA限制性内切酶酶切及其他酶的处理 | 第23页 |
5.从琼脂糖凝胶中回收DNA片段 | 第23-24页 |
6.DNA片段的连接 | 第24页 |
7.感受态大肠杆菌的制备 | 第24-25页 |
8.质粒的转化和鉴定 | 第25页 |
9.质粒DNA的双链测序 | 第25页 |
二、荧光素酶报告基因在肝细胞系中的瞬时表达及酶活性的测定 | 第25-27页 |
1.细胞培养 | 第25-26页 |
2.Lipofectin~(TM)法转染细胞 | 第26页 |
3.转染细胞荧光素酶表达活性的测定 | 第26-27页 |
三,荧光素酶报告质粒的体外表达实验 | 第27-28页 |
结果 | 第28-53页 |
一、克隆质粒的酶切图谱分析及核苷酸序列测定 | 第28-33页 |
1.中间载体质粒的构建和鉴定 | 第28-30页 |
2.荧光素酶报告质粒pGL2-PEPCK-Luc的构建及鉴定 | 第30-33页 |
二、荧光报告质粒在肝细胞内基因转录调控的研究 | 第33-53页 |
1.脂质体法转染大鼠肝癌细胞系及瞬时表达荧光素酶活性的测定 | 第33-34页 |
2.PEPCK启动子序列在肝细胞内对基因转录的调节 | 第34-53页 |
讨论 | 第53-59页 |
参考文献 | 第59-63页 |
致谢 | 第63-64页 |
综述1 | 第64-85页 |
参考文献 | 第75-85页 |
综述2 | 第85-97页 |
参考文献 | 第91-97页 |
简历 | 第97页 |