| 致谢 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 插图和附表清单 | 第12-14页 |
| 附表 | 第12页 |
| 插图 | 第12-14页 |
| 昆虫中文名、英文名、缩写和拉丁名对照 | 第14-15页 |
| 1.苏云金杆菌营养期杀虫蛋白研究进展 | 第15-30页 |
| ·Vip3基本特性 | 第17-18页 |
| ·Vip3类型 | 第18-22页 |
| ·Vip3杀虫活性 | 第22-24页 |
| ·Vip3作用机理 | 第24-26页 |
| ·vip3基因应用 | 第26-29页 |
| ·vip3基因重组 | 第26-28页 |
| ·转vip3基因作物 | 第28-29页 |
| ·展望 | 第29-30页 |
| 2.材料与方法 | 第30-41页 |
| ·材料 | 第30页 |
| ·菌株 | 第30页 |
| ·质粒载体 | 第30页 |
| ·限制性内切酶、连接酶以及其他酶类 | 第30页 |
| ·试剂盒及Marker | 第30页 |
| ·溶液 | 第30页 |
| ·使用仪器 | 第30页 |
| ·方法 | 第30-41页 |
| ·Bt质粒抽提 | 第31页 |
| ·PCR反应 | 第31-32页 |
| ·PCR产物加A | 第32-33页 |
| ·凝胶回收 | 第33页 |
| ·感受态制备 | 第33-34页 |
| ·T克隆 | 第34-36页 |
| ·表达载体构建 | 第36页 |
| ·基因表达 | 第36-37页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第37-38页 |
| ·Western Blot | 第38-39页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第39-40页 |
| ·生物测定 | 第40-41页 |
| 3.嵌和Vip3毒素特性研究 | 第41-65页 |
| ·材料与方法 | 第41-46页 |
| ·PCR筛选vip3新基因 | 第41页 |
| ·克隆vip3新基因 | 第41-43页 |
| ·构建Bt菌株LG13小型文库 | 第41-42页 |
| ·PCR筛选Bt菌株LG13小型文库 | 第42-43页 |
| ·克隆Bt菌株LG13中vip3新基因 | 第43页 |
| ·克隆vip3Aa1基因 | 第43-44页 |
| ·构建vip3Aa1和vip3Ab2嵌和基因 | 第44-45页 |
| ·表达vip3Aa1、vip3Ab2及其嵌和基因 | 第45-46页 |
| ·Vip3Aa1、Vip3Ab2及其嵌和蛋白的生物测定 | 第46页 |
| ·实验结果 | 第46-60页 |
| ·vip3Aa1和vip3Ab2及其嵌和基因的克隆 | 第46-55页 |
| ·Vip3Aa1和Vip3Ab2及其嵌和蛋白的表达 | 第55-57页 |
| ·Vip3Aa1和Vip3Ab2及其嵌和蛋白的杀虫活性 | 第57-59页 |
| ·Vip3Aa1和Vip3Ab2及其嵌和蛋白与Cry1Ac的交互抗性 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-65页 |
| 4.vip3在转基因水稻中的应用 | 第65-85页 |
| ·材料与方法 | 第65-76页 |
| ·合成cry1Abvip3H融合基因 | 第65页 |
| ·在大肠杆菌中表达vip3H基因 | 第65-66页 |
| ·在大肠杆菌中表达cry1Abvip3H融合基因 | 第66-68页 |
| ·制备Vip3H多克隆抗体 | 第68-69页 |
| ·胰蛋白酶降解Vip3H和Cry1AbVip3H | 第69页 |
| ·培育转cry1Abvip3H基因抗虫水稻 | 第69-76页 |
| ·构建cry1Abvip3H基因载体 | 第69-71页 |
| ·构建抗草甘磷基因载体 | 第71-72页 |
| ·构建抗虫抗草甘磷转基因水稻T-DNA载体 | 第72-73页 |
| ·转基因水稻培养 | 第73-75页 |
| ·转基因水稻中融合蛋白检测 | 第75-76页 |
| ·生物测定 | 第76页 |
| ·实验结果 | 第76-82页 |
| ·Vip3H以及Cry1AbVip3H的原核表达 | 第76页 |
| ·Vip3H以及Cry1AbVip3H对蛋白酶的稳定性 | 第76-78页 |
| ·Vip3H以及Cry1AbVip3H的生物测定 | 第78页 |
| ·转基因水稻的特性 | 第78-82页 |
| ·讨论 | 第82-85页 |
| 5.总讨论 | 第85-88页 |
| 参考文献 | 第88-96页 |
| 附录Ⅰ溶液 | 第96-99页 |
| 分子生物学实验溶液 | 第96-97页 |
| 转基因水稻基本培养基溶液 | 第97-99页 |
| 附录Ⅱ仪器 | 第99-100页 |
| 作者简介 | 第100页 |
