摘要 | 第1-5页 |
Abstract | 第5-11页 |
引言 | 第11-13页 |
材料和方法 | 第13-48页 |
1.腹侧中脑神经元的原代培养 | 第13-14页 |
2.免疫荧光方法鉴定腹侧中脑神经元的纯度 | 第14-15页 |
3.MES23.5多巴胺能细胞系的培养 | 第15-17页 |
4.钙黄绿素的负载及6-OHDA处理细胞铁转出功能的检测 | 第17-18页 |
·-OHDA处理的MES23.5细胞FP1和HP蛋白水平的表达变化 | 第18-21页 |
·-OHDA处理的VM神经元和MES23.5细胞FP1和HPmRNA的表达变化 | 第21-24页 |
·-OHDA处理的MES23.5细胞IRPs蛋白和mRNA水平的表达变化 | 第24-25页 |
8.IRPs小干涉RNA(siRNA)表达载体的构建 | 第25-32页 |
9.FP1或HPsiRNA表达载体的构建 | 第32-33页 |
10.细胞内铁含量的测定 | 第33页 |
11.细胞内L型铁蛋白的检测 | 第33-34页 |
12.乳酸脱氢酶的释放 | 第34-35页 |
13.细胞线粒体跨膜电位的检测 | 第35-37页 |
14.细胞内活性氧物质的检测 | 第37页 |
15.FP1表达载体及FP1和HP共表达载体的构建 | 第37-46页 |
16.HP表达载体的构建 | 第46-47页 |
17.统计学处理 | 第47-48页 |
结果 | 第48-78页 |
1.FP1和HP在分离培养的VM神经元和MES23.5细胞中的表达 | 第48-51页 |
·-OHDA对VM神经元和MES23.5细胞铁转出功能的影响 | 第51-52页 |
·-OHDA对VM神经元和MES23.5细胞FP1和HP表达的影响 | 第52-54页 |
4.枸橼酸铁胺(FAC)对FP1和HPmRNA表达的影响 | 第54页 |
·-OHDA对铁调节蛋白(IRPs)表达的影响 | 第54-56页 |
6.IRP 1和IRP2干涉后6-OHDA对MES23.5细胞中FP1和 HP表达的影响 | 第56-60页 |
7.FP1和HP干涉后对细胞内铁聚积及功能的影响 | 第60-67页 |
8.FP1和/或HP高表达对细胞内铁聚积及功能的影响 | 第67-78页 |
讨论 | 第78-88页 |
1.FP1和HP的表达降低参与了6-OHDA导致的细胞内铁聚积 | 第78-79页 |
2.FP1和HP的表达降低不是细胞内高铁的结果 | 第79-80页 |
3.IRPs参与了6-OHDA导致的FP1和HP的表达降低 | 第80-82页 |
4.FP1的表达下降造成了细胞内的铁聚积 | 第82-84页 |
5.FP1的表达下降加重了铁诱导的氧化应激 | 第84-85页 |
6.FP1和/或HP的高表达保护细胞免受氧化应激的损伤 | 第85-86页 |
7.展望 | 第86-88页 |
结论 | 第88-89页 |
参考文献 | 第89-97页 |
综述 | 第97-115页 |
附录 (缩略词表) | 第115-117页 |
攻读学位期间的研究成果 | 第117-119页 |
致谢 | 第119-120页 |