| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-23页 |
| ·植物耐盐研究进展 | 第12-18页 |
| ·盐胁迫对植物形态及生理的影响 | 第12页 |
| ·盐诱导信号转导通路 | 第12-15页 |
| ·转录调控 | 第15-16页 |
| ·转录后调控 | 第16页 |
| ·盐诱导终端基因 | 第16-18页 |
| ·紫花苜蓿耐盐研究现状简介 | 第18页 |
| ·LEA 蛋白研究进展 | 第18-20页 |
| ·抑制性差减杂交技术简介 | 第20-22页 |
| ·SSH 具体操作流程 | 第20-21页 |
| ·SSH 技术的特点 | 第21-22页 |
| ·本研究目的及意义 | 第22-23页 |
| 第二章 SMART CDNA 的合成及PCR 扩增 | 第23-33页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·实验材料 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·试剂盒 | 第24页 |
| ·引物 | 第24-25页 |
| ·主要仪器 | 第25页 |
| ·溶液配置 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-29页 |
| ·材料的获取 | 第25-26页 |
| ·总RNA 提取 | 第26页 |
| ·总RNA 的DNase I 处理 | 第26-27页 |
| ·SMART cDNA 合成 | 第27页 |
| ·最佳循环圈数的确定 | 第27-28页 |
| ·胁迫组和对照组SMART PCR 扩增 | 第28页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第28-29页 |
| ·结果与分析 | 第29-31页 |
| ·总RNA 提取 | 第29-30页 |
| ·SMART 技术扩增cDNA 最佳循环圈数的确定 | 第30页 |
| ·洗脱组分的凝胶电泳检测 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-33页 |
| ·RNA 提取 | 第31页 |
| ·SMART 技术 | 第31-33页 |
| 第三章 抑制消减杂交构建CDNA 文库 | 第33-44页 |
| ·材料 | 第33-34页 |
| ·主要化学试剂 | 第33页 |
| ·试剂盒 | 第33页 |
| ·主要仪器设备 | 第33页 |
| ·菌株及克隆载体 | 第33页 |
| ·溶液的配制 | 第33-34页 |
| ·方法 | 第34-40页 |
| ·Rsa I 酶切 | 第34页 |
| ·酶切产物纯化 | 第34-35页 |
| ·盐胁迫紫花苜蓿胁迫组dscDNA 两端接头的连接 | 第35页 |
| ·分析接头连接效率 | 第35-36页 |
| ·第一次杂交（First Hybridization） | 第36页 |
| ·第二次杂交（Second Hybridization） | 第36-37页 |
| ·第一次PCR 扩增 | 第37页 |
| ·第二次PCR 扩增（巢式PCR） | 第37-38页 |
| ·消减效率检测 | 第38页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第38-39页 |
| ·消减文库生成 | 第39-40页 |
| ·结果 | 第40-42页 |
| ·接头连接效率检测 | 第40-41页 |
| ·消减产物第二次PCR 结果 | 第41页 |
| ·消减效率检测 | 第41-42页 |
| ·消减文库中插入片段的PCR 鉴定 | 第42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| ·紫花苜蓿盐胁迫诱导相关基因消减cDNA 文库质量评价 | 第42-43页 |
| ·消减cDNA 文库在分离植物抗逆相关基因中具有明显的优势 | 第43-44页 |
| 第四章 反向NORTHERN 斑点杂交分析 | 第44-52页 |
| ·材料 | 第44-45页 |
| ·主要试剂和材料 | 第44页 |
| ·主要仪器设备 | 第44-45页 |
| ·杂交所用溶液配制 | 第45页 |
| ·方法 | 第45-49页 |
| ·探针标记 | 第45-46页 |
| ·杂交前准备 | 第46-47页 |
| ·杂交及显色 | 第47-48页 |
| ·差异表达克隆选取 | 第48-49页 |
| ·结果 | 第49-50页 |
| ·探针标记效率检测结果 | 第49页 |
| ·反向Northern 斑点杂交筛选结果 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 第五章 差异表达EST 生物信息学分析 | 第52-68页 |
| ·方法 | 第52页 |
| ·测序 | 第52页 |
| ·载体和接头序列的识别与去除 | 第52页 |
| ·重叠群（contig）的合并 | 第52页 |
| ·EST 序列的递交 | 第52页 |
| ·序列同源性比对及基因功能分类 | 第52页 |
| ·结果 | 第52-62页 |
| ·BLASTn 结果及EST 分类 | 第52-57页 |
| ·BLASTx 结果及基因功能分类（Gene ontology） | 第57-62页 |
| ·讨论 | 第62-68页 |
| ·代谢及渗透调节物质合成相关基因 | 第62-63页 |
| ·转录调控及信号转导相关基因 | 第63-65页 |
| ·光合作用相关基因 | 第65页 |
| ·机体保护相关基因 | 第65-66页 |
| ·其他 | 第66页 |
| ·结论 | 第66-68页 |
| 第六章 MSLEA3-1 基因克隆及生物信息学分析 | 第68-90页 |
| ·材料 | 第69-70页 |
| ·植物材料和E.coli 菌株 | 第69页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第69页 |
| ·引物 | 第69-70页 |
| ·原理 | 第70-71页 |
| ·3′-RACE 原理 | 第70页 |
| ·5′-RACE 原理 | 第70-71页 |
| ·方法 | 第71-75页 |
| ·制备3′-RACE-Ready 和5′-RACE-Ready cDNA | 第71-72页 |
| ·3′-RACE 和5′-RACE | 第72页 |
| ·5′-RACE Nested PCR | 第72-73页 |
| ·PCR 产物的切胶回收 | 第73页 |
| ·载体连接 | 第73-74页 |
| ·连接产物的转化 | 第74页 |
| ·单克隆挑取、培养及PCR 检测 | 第74-75页 |
| ·结果与分析 | 第75-88页 |
| ·与大豆LEA 基因同源的EST 序列及引物设计 | 第75页 |
| ·MsLEA3-1 基因3′端序列的克隆 | 第75-77页 |
| ·MsLEA3-1 基因5′端序列的克隆 | 第77-78页 |
| ·MsLEA3-1 基因的cDNA 全序列的获得及其结构分析 | 第78-80页 |
| ·MsLEA3-1 蛋白序列分析 | 第80-88页 |
| ·讨论与小结 | 第88-90页 |
| 结论与展望 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
| 作者简介 | 第102页 |
