草莓镶脉病毒(SVBV)启动子的克隆及活性分析
| 中文摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 文献综述 | 第12-21页 |
| 1 启动子的概述 | 第12页 |
| 2 植物启动子的结构 | 第12-14页 |
| ·转录起始位点 | 第12-13页 |
| ·TATA-box | 第13页 |
| ·一般上游启动子元件 | 第13-14页 |
| ·CAAT-box | 第13页 |
| ·GC-box | 第13-14页 |
| ·增强子和沉默子 | 第14页 |
| 3 植物启动子的研究进展 | 第14-19页 |
| ·组成型启动子 | 第14-15页 |
| ·CaMV 35S 启动子 | 第14-15页 |
| ·其他启动子 | 第15页 |
| ·组织或器官特异性启动子 | 第15-18页 |
| ·营养器官特异性启动子 | 第15-17页 |
| ·生殖器官特异性启动子 | 第17-18页 |
| ·诱导型启动子 | 第18-19页 |
| ·天然存在的诱导型启动子 | 第18页 |
| ·人工构建的诱导型启动子 | 第18-19页 |
| ·复合的诱导型启动子 | 第19页 |
| 4 植物病毒启动子研究概况 | 第19-21页 |
| 引言 | 第21-22页 |
| 材料与方法 | 第22-31页 |
| 1 供试材料 | 第22页 |
| ·病样来源 | 第22页 |
| ·植物材料 | 第22页 |
| ·菌种和载体 | 第22页 |
| ·酶和化学试剂 | 第22页 |
| ·常用缓冲溶液和培养基 | 第22页 |
| ·抗生素 | 第22页 |
| ·仪器设备 | 第22页 |
| 2 试验方法 | 第22-31页 |
| ·叶片总DNA 的提取 | 第22-23页 |
| ·PCR 技术 | 第23页 |
| ·PCR 产物的克隆 | 第23-25页 |
| ·PCR 产物回收和纯化 | 第23-24页 |
| ·PCR 产物的连接 | 第24页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第24页 |
| ·连接产物的转化 | 第24-25页 |
| ·阳性克隆的PCR 鉴定 | 第25页 |
| ·质粒提取 | 第25页 |
| ·克隆基因的测序、分析和登录 | 第25页 |
| ·SVBV 启动子的克隆 | 第25-26页 |
| ·启动子的引物设计 | 第25-26页 |
| ·启动子的PCR 扩增 | 第26页 |
| ·启动子的序列分析 | 第26页 |
| ·启动子序列相似性分析 | 第26页 |
| ·启动子序列结构分析 | 第26页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第26-27页 |
| ·植物表达载体的构建策略 | 第26-27页 |
| ·植物表达载体的构建过程 | 第27页 |
| ·三亲交配 | 第27-28页 |
| ·瞬时表达 | 第28页 |
| ·gus 活性分析 | 第28-29页 |
| ·gus 活性的组织化学分析 | 第28页 |
| ·荧光光度测定 | 第28页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第28-29页 |
| ·gus 荧光活性分析 | 第29页 |
| ·烟草转化及卡那霉素抗性植株的再生 | 第29-30页 |
| ·转基因烟草的PCR 鉴定 | 第30-31页 |
| 结果与分析 | 第31-39页 |
| 1 SVBV 启动子的克隆 | 第31页 |
| ·启动子的PCR 扩增 | 第31页 |
| ·启动子的克隆 | 第31页 |
| 2 SVBV 启动子的序列分析 | 第31-33页 |
| ·启动子序列相似性分析 | 第31-32页 |
| ·启动子序列结构分析 | 第32-33页 |
| 3 植物表达载体的构建 | 第33-35页 |
| 4 瞬时表达中gus 活性的组织化学检测 | 第35-36页 |
| 5 瞬时表达中gus 荧光活性分析 | 第36页 |
| 6 烟草的转化和卡那抗性植株的获得 | 第36-37页 |
| 7 转基因烟草的PCR 检测 | 第37-39页 |
| 讨论 | 第39-41页 |
| 1 SVBV启动子序列的克隆与序列分析 | 第39-40页 |
| 2 SVBV 启动子的活性分析 | 第40页 |
| 3 表达载体以根癌土壤杆菌介导转化烟草 | 第40-41页 |
| 结论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-48页 |
| 附录 A | 第48-53页 |
| 附录 B | 第53-54页 |
| 附录 C | 第54-56页 |
| 附录 D | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者简介 | 第58页 |
| 附 在读期间发表论文 | 第58页 |