| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 前言 | 第13-15页 |
| 1 文献综述 | 第15-25页 |
| ·热休克蛋白的研究进展 | 第15-18页 |
| ·热休克蛋白的分子结构特征与分类 | 第18-19页 |
| ·热休克基因及表达调控 | 第19-21页 |
| ·热激应答元件和热激因子 | 第19页 |
| ·热休克蛋白基因转录激活过程 | 第19-20页 |
| ·热休克蛋白基因转录后水平调控 | 第20-21页 |
| ·热休克蛋白的主要生物学功能 | 第21-25页 |
| 2 谢氏宽漠王Mshsp70和Mshsc70基因的克隆与序列分析 | 第25-48页 |
| ·研究材料 | 第25-27页 |
| ·实验材料 | 第25页 |
| ·实验仪器和试剂 | 第25-26页 |
| ·实验溶液及其配制 | 第26-27页 |
| ·研究方法 | 第27-31页 |
| ·总RNA提取 | 第27页 |
| ·反转录 | 第27页 |
| ·谢氏宽漠王Mshsp70和Mshsc70基因的克隆 | 第27-30页 |
| ·引物设计 | 第27-28页 |
| ·谢氏宽漠王Mshsp70和Mshsc70基因cDNA序列保守区域的扩增 | 第28页 |
| ·谢氏宽漠王Mshsp70和Mshsc70基因cDNA序列3′末端的扩增 | 第28-29页 |
| ·PCR产物琼脂糖电泳检测和回收纯化 | 第29页 |
| ·PCR纯化产物的克隆测序 | 第29-30页 |
| ·谢氏宽漠王Mshsp70和Mshsc70基因序列拼接和生物信息学分析 | 第30-31页 |
| ·结果与讨论 | 第31-47页 |
| ·总RNA的提取 | 第31页 |
| ·谢氏宽漠王Mshsp70和Mshsc70基因的克隆 | 第31-32页 |
| ·谢氏宽漠王Mshsp70和Mshsp70基因cDNA序列特征分析 | 第32-47页 |
| ·基因核苷酸序列基本分析 | 第32-38页 |
| ·蛋白质一级序列分析 | 第38-39页 |
| ·蛋白质功能基序分析 | 第39-41页 |
| ·蛋白质二级结构分析 | 第41-44页 |
| ·蛋白质三级结构分析 | 第44-45页 |
| ·分子进化分析 | 第45-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| 3 谢氏宽漠王β-actin基因cDNA克隆及表达量检测 | 第48-57页 |
| ·引言 | 第48页 |
| ·谢氏宽漠王β-actin基因的克隆与序列分析 | 第48-53页 |
| ·研究材料 | 第48页 |
| ·研究方法 | 第48-50页 |
| ·总RNA提取和反转录 | 第48-49页 |
| ·谢氏宽漠王β-actin基因的克隆 | 第49页 |
| ·谢氏宽漠王β-actin基因序列拼接及同源性对比 | 第49-50页 |
| ·结果与讨论 | 第50-53页 |
| ·谢氏宽漠王β-actin基因的克隆 | 第50页 |
| ·谢氏宽漠王β-actin基因cDNA全长序列特征分析 | 第50-52页 |
| ·分子进化分析 | 第52-53页 |
| ·热激条件下β-actin基因mRNA水平表达量检测 | 第53-57页 |
| ·研究材料 | 第53页 |
| ·研究方法 | 第53-54页 |
| ·热激实验 | 第53页 |
| ·总RNA提取和反转录 | 第53页 |
| ·β-actin热激后表达量检测 | 第53-54页 |
| ·结果 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| 4 谢氏宽漠王Mshsp70和Mshsc70基因在热激条件下的表达分析 | 第57-62页 |
| ·研究材料 | 第57页 |
| ·研究方法 | 第57-58页 |
| ·热激实验 | 第57页 |
| ·总RNA提取和反转录 | 第57页 |
| ·Mshsp70和Mshsc70基因表达的半定量RT-PCR分析 | 第57-58页 |
| ·结果 | 第58-60页 |
| ·讨论 | 第60-62页 |
| 5 谢氏宽漠王Mshsp70基因的重组表达及鉴定 | 第62-74页 |
| ·研究材料 | 第62-63页 |
| ·菌株、昆虫来源 | 第62页 |
| ·主要仪器设备和实验试剂 | 第62-63页 |
| ·研究方法 | 第63-68页 |
| ·pET-DsbA/Mshsp70原核表达载体的构建 | 第63-66页 |
| ·Mshsp70片段的克隆 | 第64-65页 |
| ·pET-DsbA质粒的提取 | 第65页 |
| ·pET-DsbA质粒及Mshsp70片段的双酶切 | 第65页 |
| ·重组转化及鉴定 | 第65-66页 |
| ·Mshsp70融合蛋白的诱导表达 | 第66-67页 |
| ·诱导目的蛋白表达 | 第66页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测目的蛋白的表达 | 第66-67页 |
| ·表达产物的亲和纯化 | 第67-68页 |
| ·纯化蛋白PBS溶液配置方法 | 第67页 |
| ·纯化融合蛋白 | 第67-68页 |
| ·考马斯亮蓝染色法测定纯化蛋白浓度 | 第68页 |
| ·多克隆抗HSP70抗体的制备 | 第68页 |
| ·双向免疫扩散法测定效价 | 第68页 |
| ·Western Blot鉴定 | 第68页 |
| ·主要试剂配置 | 第68页 |
| ·转移蛋白质到硝酸纤维素膜上 | 第68页 |
| ·免疫印迹膜的处理 | 第68页 |
| ·结果 | 第68-73页 |
| ·pET-DsbA/Mshsp70载体Mshsp70 cDNA片段的克隆 | 第68-69页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第69页 |
| ·重组融合蛋白HSP70的诱导表达 | 第69页 |
| ·融合蛋白HSP70的纯化 | 第69-71页 |
| ·抗血清制备及多克隆抗体效价测定 | 第71-72页 |
| ·Western Blot鉴定 | 第72-73页 |
| ·讨论 | 第73-74页 |
| 6 小结 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 攻读学位期间取得的科研成果 | 第86页 |
