| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 第一部分 6种酵母成分蛋白基因的表达及纯化 | 第11-40页 |
| ·实验材料 | 第11-16页 |
| ·质粒 | 第11页 |
| ·菌种 | 第11-12页 |
| ·酶及化学试剂 | 第12页 |
| ·主要仪器设备 | 第12-13页 |
| ·培养基的配制 | 第13-14页 |
| ·试剂的配制 | 第14-16页 |
| ·实验方法 | 第16-28页 |
| ·引物设计及PCR扩增获得目的基因片段 | 第16-17页 |
| ·酶切、酶连及转化 | 第17-18页 |
| ·菌落PCR验证转化结果 | 第18-19页 |
| ·酶切验证并转化到表达宿主中 | 第19页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA抽提 | 第19-20页 |
| ·DH5α、Rosetta(DE3)pLysS感受态细胞的制备与转化 | 第20-21页 |
| ·细菌诱导 | 第21-22页 |
| ·提取酵母基因组DNA | 第22页 |
| ·SDS-PAGE | 第22-23页 |
| ·蛋白纯化 | 第23-25页 |
| ·免疫 | 第25页 |
| ·Western blot检测抗体 | 第25-28页 |
| ·试验结果 | 第28-37页 |
| ·含目的基因的重组载体的构建 | 第28-30页 |
| ·转化后的初步诱导试验 | 第30-33页 |
| ·以包涵体形式表达的蛋白的纯化 | 第33-36页 |
| ·可溶性蛋白的Ni柱亲和纯化 | 第36页 |
| ·抗体的检测 | 第36-37页 |
| ·小结及讨论 | 第37-38页 |
| ·参考文献 | 第38-40页 |
| 第二部分 目的基因在酵母中的表达 | 第40-48页 |
| ·实验材料 | 第40-41页 |
| ·质粒 | 第40页 |
| ·菌种 | 第40页 |
| ·培养基配制 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41-43页 |
| ·将Ep11克隆到pEMBLyex4中 | 第41页 |
| ·酵母感受态制备及转化 | 第41-43页 |
| ·酿酒酵母菌落PCR | 第43页 |
| ·酿酒酵母内蛋白质的诱导表达 | 第43页 |
| ·SDS-PAGE检测诱导表达情况 | 第43页 |
| ·实验结果 | 第43-46页 |
| ·pEMBLyex4-Ep11重组质粒的构建 | 第43-45页 |
| ·SDS-PAGE分析诱导表达情况 | 第45页 |
| ·6种不同形式的酵母RPL36B在酿酒酵母中的表达 | 第45-46页 |
| ·小结及分析 | 第46页 |
| ·参考文献 | 第46-48页 |
| 第三部分 无细胞蛋白表达体系的构建 | 第48-55页 |
| ·实验材料 | 第48-51页 |
| ·质粒 | 第48页 |
| ·菌种 | 第48页 |
| ·酶及化学试剂 | 第48页 |
| ·试剂配制 | 第48-51页 |
| ·实验方法 | 第51-53页 |
| ·S12 E.coli.Extract的制备 | 第51页 |
| ·无细胞蛋白表达体系的建立 | 第51-52页 |
| ·SDS-PAGE及银染检测蛋白表达情况 | 第52-53页 |
| ·实验结果说明 | 第53页 |
| ·小结及讨论 | 第53-55页 |
| 文献综述 | 第55-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 附录:合成引物序列汇总 | 第62页 |