| 中文摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 符号说明 | 第14-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-32页 |
| 一.植物盐害机理及其应对盐胁迫的策略 | 第15-19页 |
| ·植物盐害机理 | 第15-16页 |
| ·离子胁迫 | 第15页 |
| ·渗透胁迫 | 第15-16页 |
| ·氧化胁迫 | 第16页 |
| ·呼吸受阻 | 第16页 |
| ·营养亏缺 | 第16页 |
| ·光合作用下降 | 第16页 |
| ·植物应对盐胁迫的策略 | 第16-19页 |
| ·重建体内离子平衡 | 第17页 |
| ·合成和积累渗透保护物质 | 第17页 |
| ·清除细胞内的活性氧(ROS) | 第17-18页 |
| ·增加合成抗盐胁迫蛋白质和多胺类物质 | 第18页 |
| ·激素调节 | 第18页 |
| ·改变基因表达 | 第18-19页 |
| 二.SOS基因家族与植物耐盐性 | 第19-22页 |
| ·SOS基因家族 | 第19-21页 |
| ·SOS1基因 | 第19-20页 |
| ·SOS2基因 | 第20页 |
| ·SOS3基因 | 第20页 |
| ·SOS4基因 | 第20页 |
| ·SOS5基因 | 第20-21页 |
| ·SOS基因与植物耐盐性的关系 | 第21-22页 |
| 三.苜蓿的遗传转化研究进展 | 第22-30页 |
| ·苜蓿的组织培养 | 第23-25页 |
| ·基因型的选择 | 第23页 |
| ·外植体的选择 | 第23-24页 |
| ·愈伤组织的诱导与增殖分化培养基和激素的选择 | 第24-25页 |
| ·苜蓿的遗传转化方法和转化内容 | 第25-27页 |
| ·农杆菌介导法 | 第25-26页 |
| ·基因枪法 | 第26页 |
| ·电击和聚乙二醇法 | 第26页 |
| ·细胞融合技术 | 第26-27页 |
| ·花粉管通道法 | 第27页 |
| ·转基因阳性苜蓿的筛选和检测方法 | 第27-28页 |
| ·外源基因的表达分析方法 | 第28-30页 |
| ·RT-PCR分析 | 第28-29页 |
| ·Northern blotting分析 | 第29页 |
| ·表达蛋白分析 | 第29-30页 |
| 四.国内外利用基因工程改良苜蓿耐盐性的研究 | 第30-31页 |
| 五.实验的目的和意义 | 第31-32页 |
| 第二部分 材料和方法 | 第32-50页 |
| 一.农杆菌转化的受体材料 | 第32页 |
| ·苜蓿胚性愈伤组织 | 第32页 |
| ·下胚轴来源的苜蓿胚性愈伤组织 | 第32页 |
| ·子叶来源的苜蓿胚性愈伤组织 | 第32页 |
| ·叶片来源的胚性愈伤组织 | 第32页 |
| ·苜蓿叶片和子叶 | 第32页 |
| 二.培养基种类及成分 | 第32-34页 |
| ·愈伤组织诱导培养基 | 第32-33页 |
| ·愈伤组织增殖培养基 | 第33页 |
| ·共培养培养基 | 第33页 |
| ·愈伤组织筛选培养基 | 第33页 |
| ·再生培养基 | 第33-34页 |
| ·抗性植株筛选培养基: | 第34页 |
| ·壮苗生根培养基: | 第34页 |
| ·农杆菌培养基YEP培养基: | 第34页 |
| 三.选择培养基中PPT选择压的确定 | 第34页 |
| 四.转化所用的农杆菌菌株、目的基因和质粒载体结构 | 第34-36页 |
| 五.转化 | 第36-39页 |
| ·碱裂解法制备小量质粒DNA | 第36-38页 |
| ·药品配制 | 第36页 |
| ·提取步骤 | 第36-37页 |
| ·质粒的双酶切验证: | 第37-38页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的制备、转化子的获得及其检测 | 第38-39页 |
| ·药品配制 | 第38页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞制备、转化子的获得及其检测步骤 | 第38-39页 |
| ·侵染和共培养 | 第39页 |
| 六.苜蓿转基因体系的优化 | 第39-40页 |
| ·外植体类型对转化效率的影响 | 第39-40页 |
| ·不同菌液浓度和不同菌株对转化效率的影响 | 第40页 |
| ·侵染时间对转化效率的影响 | 第40页 |
| ·乙酰丁香酮(AS)和70%酒精处理外植体对转化效率的影响 | 第40页 |
| 七.筛选和再生 | 第40-41页 |
| ·先筛选后再生 | 第40-41页 |
| ·先再生后筛选 | 第41页 |
| 八.GUS基因组织化学染色分析 | 第41-42页 |
| ·药品配方 | 第41页 |
| ·药品配制 | 第41-42页 |
| ·操作步骤 | 第42页 |
| 九.DNA提取 | 第42-43页 |
| ·药品配方 | 第42页 |
| ·提取步骤 | 第42-43页 |
| 十.抗性植株的PCR分析 | 第43-45页 |
| ·引物 | 第43-44页 |
| ·扩增体系 | 第44页 |
| ·扩增程序 | 第44页 |
| ·电泳 | 第44-45页 |
| ·药品配制 | 第44-45页 |
| ·电泳 | 第45页 |
| 十一.耐盐性分析 | 第45-50页 |
| ·试验材料与试验设计 | 第45页 |
| ·指标测定与方法 | 第45-50页 |
| ·叶片原生质膜相对透性的测定 | 第45-46页 |
| ·脯氨酸含量的测定 | 第46-47页 |
| ·叶片中叶绿素含量的测定 | 第47-48页 |
| ·叶片中超氧化物歧化酶SOD、POD、MDA的测定 | 第48-50页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第50-63页 |
| 一.不同消毒时间处理对苜蓿种子污染率和发芽率的影响 | 第50页 |
| 二.愈伤组织的诱导与增殖分化 | 第50-53页 |
| ·由种子直接诱导的愈伤组织 | 第50-51页 |
| ·由下胚轴诱导的愈伤组织 | 第51页 |
| ·由叶片或子叶诱导的愈伤组织 | 第51-52页 |
| ·愈伤组织的增殖及分化 | 第52-53页 |
| ·叶片和子叶的分化及植株再生 | 第53页 |
| ·壮苗生根培养基的选择 | 第53页 |
| 三.选择培养基中PPT选择压的确定 | 第53-54页 |
| 四.苜蓿转基因体系的优化 | 第54-56页 |
| ·外植体类型对转化效率的影响 | 第54页 |
| ·不同菌株对转化效率的影响 | 第54-55页 |
| ·侵染时间对转化效率的影响 | 第55页 |
| ·乙酰丁香酮(AS)和70%酒精处理外植体对转化效率的影响 | 第55-56页 |
| 五.筛选和再生 | 第56-57页 |
| ·先筛选后再生 | 第56页 |
| ·先再生后筛选 | 第56-57页 |
| 六.转SOS2-SOS3基因苜蓿愈伤组织GUS染色分析 | 第57页 |
| 七.转基因植株的生长情况 | 第57-58页 |
| 八.PCR检测结果和转化频率 | 第58-59页 |
| 九.转SOS基因和未转基因苜蓿受NaCl胁迫后的耐盐性表现 | 第59-60页 |
| 十.转基因植株后代耐盐性结果与分析 | 第60-63页 |
| ·盐胁迫对苜蓿试管苗电导率的影响 | 第60页 |
| ·盐胁迫对苜蓿试管苗丙二醛含量的影响 | 第60-61页 |
| ·盐胁迫对苜蓿试管苗叶绿素含量(Chla+b)的影响 | 第61-62页 |
| ·盐胁迫对苜蓿试管苗脯氨酸含量的影响 | 第62页 |
| ·盐胁迫对苜蓿试管苗POD和SOD活性的影响 | 第62-63页 |
| 第四部分 讨论 | 第63-66页 |
| 一.苜蓿组织培养高效再生体系的建立 | 第63页 |
| 二.影响根癌农杆菌介导苜蓿遗传转化效率的因素 | 第63-64页 |
| 三.转SOS2-SOS3基因苜蓿组培苗对盐胁迫的生理响应 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第73页 |
