| 课题Ⅰ摘要 | 第1-12页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 课题Ⅱ摘要 | 第12-18页 |
| 摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-18页 |
| 课题Ⅲ摘要 | 第18-21页 |
| 摘要 | 第18-19页 |
| Abstract | 第19-21页 |
| 课题Ⅰ:SCN5A点突变导致扩心病发生的机制研究 | 第21-51页 |
| 前言 | 第21-22页 |
| 1 材料与方法 | 第22-30页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·方法 | 第23-30页 |
| ·HEK293细胞培养 | 第23-24页 |
| ·HEK293细胞的复苏 | 第23页 |
| ·HEK 293细胞的传代培养 | 第23页 |
| ·HEK 293细胞的冻存 | 第23-24页 |
| ·重组腺病毒pAd-SCN5A的构建与扩增 | 第24-27页 |
| ·重组腺病毒pAd-SCN5A的构建 | 第24页 |
| ·阳性细胞克隆的筛选及重组腺病毒小量扩增 | 第24页 |
| ·重组腺病毒载体的PCR鉴定 | 第24-25页 |
| ·重组腺病毒的大量扩增和保存 | 第25页 |
| ·重组腺病毒的浓缩与纯化 | 第25-26页 |
| ·病毒滴度测定 | 第26-27页 |
| ·心肌细胞的分离与培养 | 第27-28页 |
| ·心肌特异性β-受体激动剂浓度的选择 | 第28页 |
| ·钙荧光指示剂的选择 | 第28页 |
| ·激光共聚焦测定心肌细胞钙变化 | 第28-29页 |
| ·分组及接种病毒 | 第28页 |
| ·β-受体激动剂和缺氧处理心肌细胞 | 第28-29页 |
| ·钙荧光指示剂负载 | 第29页 |
| ·共聚焦显微镜钙成像 | 第29页 |
| ·肌质网钙容量的测定 | 第29页 |
| ·Realtime PCR检测钠钙相关基因表达情况 | 第29-30页 |
| ·荧光双标记流式细胞仪测定细胞凋亡 | 第30页 |
| ·数据的统计与分析 | 第30页 |
| 2 结果 | 第30-44页 |
| ·重组腺病毒Ad-GFP-SCN5A(MT/WT)的构建与鉴定 | 第30-32页 |
| ·重组腺病毒Ad-GFP-SCN5A(MT/WT)的扩增、纯化及滴度测定 | 第32-33页 |
| ·β-受体激动剂Xamoterol浓度的选择 | 第33-34页 |
| ·钙指示剂的选择 | 第34-35页 |
| ·重组病毒感染后钙相关基因的表达情况 | 第35-39页 |
| ·共聚焦显微镜钙成像相关指标的结果 | 第39-43页 |
| ·细胞凋亡结果 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-48页 |
| ·腺病毒的构建、鉴定、浓缩与纯化 | 第44-45页 |
| ·对实验分组方案及选择的检测指标的解释 | 第45-46页 |
| ·SCN5A A1180V突变与Ca~(2+)的关系 | 第46-48页 |
| 4 结论 | 第48页 |
| 参考文献 | 第48-51页 |
| 课题Ⅱ:BMP2诱导人MSC向心肌样细胞分化的可能性及其机制 | 第51-114页 |
| 第一章 人骨髓间充质干细胞的获取与鉴定 | 第51-64页 |
| 前言 | 第51页 |
| 1 材料与方法 | 第51-54页 |
| ·材料 | 第51-53页 |
| ·细胞来源 | 第51页 |
| ·细胞培养相关试剂及用品 | 第51-52页 |
| ·主要实验仪器 | 第52页 |
| ·主要试剂配制 | 第52-53页 |
| ·方法 | 第53-54页 |
| ·人骨髓间充质干细胞的分离 | 第53页 |
| ·人骨髓间充质干细胞来源与培养基的选择 | 第53页 |
| ·人骨髓间充质干细胞的鉴定 | 第53-54页 |
| ·流式细胞仪鉴定表面抗原 | 第53-54页 |
| ·化学诱导向脂肪细胞分化 | 第54页 |
| ·诱导方案 | 第54页 |
| ·油红染色 | 第54页 |
| 2 结果 | 第54-59页 |
| ·MSCs原代培养情况 | 第54-55页 |
| ·MSCs传代培养情况 | 第55-56页 |
| ·MSCs培养基的选择 | 第56-57页 |
| ·MSCs的表型特征 | 第57-58页 |
| ·MSCs诱导为脂肪细胞的形态变化 | 第58-59页 |
| 3 讨论 | 第59-61页 |
| 4 结论 | 第61页 |
| 参考文献 | 第61-64页 |
| 第二章 PPARγ和RUNX2 siRNA片段的筛选 | 第64-94页 |
| 前言 | 第64页 |
| 1 材料与方法 | 第64-79页 |
| ·材料 | 第64-67页 |
| ·仪器 | 第64-65页 |
| ·试剂 | 第65-66页 |
| ·溶液及其配制 | 第66-67页 |
| ·方法 | 第67-79页 |
| ·PPARγ和RUNX2真核表达质粒的构建 | 第67-73页 |
| ·引物与siRNA | 第67-68页 |
| ·基因的扩增与电泳 | 第68-69页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第69-70页 |
| ·pEGFP-N1质粒的制备 | 第70-71页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第70页 |
| ·质粒的转化 | 第70页 |
| ·质粒的抽提 | 第70-71页 |
| ·双酶切 | 第71页 |
| ·连接 | 第71-72页 |
| ·重组质粒的转化 | 第72页 |
| ·重组质粒的抽提 | 第72页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第72-73页 |
| ·PCR鉴定 | 第72-73页 |
| ·序列测定与序列分析 | 第73页 |
| ·PPARγ和RUNX2 siRNA片段及浓度的筛选 | 第73-79页 |
| ·转染细胞与转染方式的选择 | 第73-74页 |
| ·RNA传送效率的判断 | 第74页 |
| ·siRNA和重组质粒共转到HEK293 | 第74页 |
| ·蛋白的提取 | 第74-75页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第75页 |
| ·RNA的提取 | 第75-76页 |
| ·cDNA的合成 | 第76-77页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第77页 |
| ·Western blotting | 第77-78页 |
| ·RT-PCR筛选siRNA片段及浓度 | 第78页 |
| ·Realtime-PCR筛选siRNA片段及浓度 | 第78-79页 |
| ·数据的统计与分析 | 第79页 |
| 2 结果 | 第79-90页 |
| ·将PPARγ和RUNX2基因的扩增 | 第79-80页 |
| ·酶切 | 第80页 |
| ·质粒的鉴定 | 第80-81页 |
| ·质粒转染方式与转染细胞的选择 | 第81-82页 |
| ·RNA的传送效率 | 第82-83页 |
| ·质粒与siRNA片段共转293细胞 | 第83-84页 |
| ·PPARγ siRNA有效片段的筛选 | 第84-85页 |
| ·RUNX2 siRNA有效片段的筛选 | 第85-87页 |
| ·siRNA共转对基因的抑制及siRNA浓度的选择 | 第87-90页 |
| 3 讨论 | 第90-91页 |
| ·PPARγ和RUNX2重组质粒的构建 | 第90页 |
| ·转染方式与转染细胞的选择 | 第90-91页 |
| ·PPARγ和RUNX2基因siRNA有效片段和有效浓度的筛选 | 第91页 |
| 4 结论 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-94页 |
| 第三章 BMP2诱导MSC向心肌样细胞分化的探讨 | 第94-114页 |
| 前言 | 第94页 |
| 1 材料与方法 | 第94-97页 |
| ·材料 | 第94-95页 |
| ·方法 | 第95-97页 |
| ·siRNA传送到MSC效率的评估 | 第95页 |
| ·诱导与抑制的方案 | 第95页 |
| ·fluo-red RNA和siRNA转染MSC细胞 | 第95页 |
| ·RNA的提取 | 第95页 |
| ·cDNA的合成 | 第95页 |
| ·PCR检测基因的表达 | 第95-96页 |
| ·Realtime-PCR检测基因的表达 | 第96-97页 |
| ·数据的统计与分析 | 第97页 |
| 2 结果 | 第97-105页 |
| ·RNA传送到MSC效率的评估 | 第97-100页 |
| ·诱导的各组细胞光镜下观察结果 | 第100页 |
| ·MSC经诱导和干扰后基因的表达 | 第100-105页 |
| 3 讨论 | 第105-109页 |
| ·对诱导与抑制方案的解释 | 第105-106页 |
| ·指标性转录因子与结构蛋白的选择 | 第106-107页 |
| ·MSC诱导与抑制过程中基因表达情况分析 | 第107-108页 |
| ·机制的探讨 | 第108-109页 |
| 4 结论 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-114页 |
| 课题Ⅲ:CTSS基因启动子区-25G/A多态对中国人群冠心病的预测 | 第114-128页 |
| 前言 | 第114页 |
| 1 材料与方法 | 第114-118页 |
| ·材料 | 第114-115页 |
| ·方法 | 第115-118页 |
| ·病例组与对照组 | 第115页 |
| ·基本特征及定义 | 第115-116页 |
| ·基因分型 | 第116-118页 |
| ·DNA提取 | 第116页 |
| ·组织蛋白酶S基因扩增 | 第116-117页 |
| ·组织蛋白酶S基因多态性分析 | 第117-118页 |
| ·统计分析 | 第118页 |
| 2 结果 | 第118-124页 |
| ·基本特征 | 第118-119页 |
| ·基因型分布 | 第119-124页 |
| 3 讨论 | 第124-125页 |
| 4 结论 | 第125页 |
| 参考文献 | 第125-128页 |
| 致谢 | 第128-129页 |
| 附1 用于构建重组粒的PPAR γ序列分析 | 第129-131页 |
| 附2 用于构建重组粒的RUNX2序列分析 | 第131-134页 |
| 附3 pEGFP-N1质粒的酶切位点 | 第134-135页 |
| 附4 文献综述 | 第135-147页 |
| 附5 论文发表与参加的学术会议 | 第147-148页 |
