| 摘要 | 第1-18页 |
| Abstract | 第18-25页 |
| 第一部分 文献综述 | 第25-53页 |
| 1.李斯特菌属概述 | 第26页 |
| 2.单增李斯特菌的致病力 | 第26-29页 |
| 3.单增李斯特菌的毒力因子与致病机理 | 第29-49页 |
| ·抗应激相关因子 | 第29-45页 |
| ·黏附与侵袭相关因子 | 第45-48页 |
| ·细胞内感染相关因子 | 第48-49页 |
| ·其他毒力因子 | 第49页 |
| 4.李斯特菌属细菌分子进化 | 第49-52页 |
| ·水平转移机制 | 第49-51页 |
| ·非典型李斯特菌 | 第51-52页 |
| 5.研究目的 | 第52-53页 |
| 第二部分 试验研究 | 第53-288页 |
| 第一章 食源性单增李斯特菌分子流行病学特征与致病力 | 第54-95页 |
| 第一节 李斯特菌种别及谱系鉴定方法的建立 | 第54-66页 |
| 1.材料与方法 | 第55-59页 |
| ·菌株及其培养 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·基因组DNA制备 | 第55页 |
| ·PCR体系建立 | 第55-58页 |
| ·食品相关分离株鉴定 | 第58页 |
| ·种别确证试验 | 第58页 |
| ·基因登录号 | 第58-59页 |
| 2.结果 | 第59-66页 |
| ·PCR靶基因序列分析 | 第59-61页 |
| ·多重PCR的建立 | 第61-63页 |
| ·食品相关分离株的鉴定及种别确证 | 第63-65页 |
| ·非典型单增李斯特菌特性分析 | 第65-66页 |
| 第二节 我国代表性食品中李斯特菌的流行特征及致病性 | 第66-81页 |
| 1.材料与方法 | 第67-74页 |
| ·菌株及其培养 | 第67页 |
| ·主要试剂 | 第67页 |
| ·李斯特菌流行情况分析 | 第67页 |
| ·谱系、血清型与流行克隆分析 | 第67-70页 |
| ·感染相关基因检测 | 第70-71页 |
| ·碳水化合物发酵试验 | 第71页 |
| ·实验动物毒力试验 | 第71-72页 |
| ·细胞空斑试验 | 第72-73页 |
| ·基因登录号 | 第73-74页 |
| 2.结果 | 第74-81页 |
| ·李斯特菌在13个省食品中的流行情况 | 第74页 |
| ·李斯特菌在7大类食品中的流行情况 | 第74-76页 |
| ·李斯特菌各个种在食品中的分布 | 第76-77页 |
| ·单增李斯特菌食品分离株的谱系与血清型 | 第77-78页 |
| ·单增李斯特菌食品分离株的感染相关基因构成 | 第78-79页 |
| ·单增李斯特菌食品分离株的体内外致病力 | 第79-81页 |
| 第三节 进口水产品中李斯特菌的检出率及致病性 | 第81-92页 |
| 1.材料与方法 | 第82-86页 |
| ·菌株及其培养 | 第82页 |
| ·主要试剂 | 第82页 |
| ·谱系、血清型与流行克隆分析 | 第82页 |
| ·多位点序列分型与分析 | 第82-86页 |
| ·感染相关基因检测 | 第86页 |
| ·小鼠相对毒力试验 | 第86页 |
| ·基因登录号 | 第86页 |
| 2.结果 | 第86-92页 |
| ·李斯特菌在进口水产品中的流行情况 | 第86-87页 |
| ·单增李斯特菌进口水产品分离株的谱系与血清型 | 第87页 |
| ·单增李斯特菌食品分离株的多位点序列分型 | 第87-90页 |
| ·单增李斯特菌进口水产品分离株的感染相关基因构成 | 第90页 |
| ·单增李斯特菌进口水产品分离株的致病力 | 第90-92页 |
| 本章讨论 | 第92-95页 |
| 第二章 单增李斯特菌谱系Ⅲ的多样性与分子进化 | 第95-174页 |
| 第一节 内化素家族在单增李斯特菌中的分布 | 第95-113页 |
| 1.材料与方法 | 第96-105页 |
| ·菌株及其培养 | 第96页 |
| ·主要试剂 | 第96页 |
| ·内化素基因检测 | 第96-105页 |
| ·细胞黏附力测定 | 第105页 |
| 2.结果 | 第105-113页 |
| ·内化素AB在单增李斯特菌中的分布 | 第105页 |
| ·内化素C、内化素I和内化素J在单增李斯特菌中的分布 | 第105-106页 |
| ·ascB-dapE内化素岛在单增李斯特菌中的多态性 | 第106-107页 |
| ·内化素F与内化素lmo2026在单增李斯特菌中的分布 | 第107页 |
| ·其他种特异性内化素基因在单增李斯特菌谱系Ⅲ中的分布 | 第107-108页 |
| ·单增李斯特菌.无害李斯特菌共有内化素基因在单增李斯特菌谱系Ⅲ的分布 | 第108页 |
| ·谱系Ⅲ的内化素型 | 第108页 |
| ·不同ascB-dapE结构菌株的黏附力 | 第108-113页 |
| 第二节 单增李斯特菌谱系Ⅲ菌株的表型与基因型多态性 | 第113-125页 |
| 1.材料与方法 | 第113-117页 |
| ·菌株及其培养 | 第113-114页 |
| ·主要试剂 | 第114页 |
| ·血清分型 | 第114-115页 |
| ·生化鉴定 | 第115页 |
| ·生长特性 | 第115页 |
| ·16S rRNA序列分析 | 第115页 |
| ·多位点序列分型 | 第115页 |
| ·ascB-dapE内化素岛结构分析 | 第115-117页 |
| 2.结果 | 第117-125页 |
| ·血清分型 | 第117页 |
| ·16S rRNA进化树 | 第117页 |
| ·生化反应特性 | 第117-118页 |
| ·生长特性 | 第118页 |
| ·多位点序列分型 | 第118-124页 |
| ·ascB-dapE内化素岛结构 | 第124-125页 |
| 第三节 单增李斯特菌谱系Ⅲ菌株的致病力分析 | 第125-141页 |
| 1.材料与方法 | 第126-131页 |
| ·菌株及其培养 | 第126页 |
| ·人工胃液中的存活力测定 | 第126页 |
| ·细胞黏附力、侵袭力与空斑形成能力测定 | 第126页 |
| ·小鼠毒力试验 | 第126页 |
| ·谱系Ⅲ菌株对强毒株M5的保护力 | 第126-127页 |
| ·感染相关基因检测 | 第127-129页 |
| ·inlA提前终止现象分析 | 第129页 |
| ·PrfA氨基酸序列分析 | 第129页 |
| ·磷脂酶PC-PLC体外溶脂活性测定 | 第129页 |
| ·主要毒力基因与调控基因的荧光定量PCR | 第129-130页 |
| ·基于体外强溶脂活性的M7转座突变体筛选 | 第130-131页 |
| 2.结果 | 第131-141页 |
| ·胃液存活力 | 第131页 |
| ·细胞黏附力 | 第131页 |
| ·细胞间扩散能力 | 第131-132页 |
| ·小鼠毒力 | 第132-134页 |
| ·谱系Ⅲ菌株对强毒株攻击的保护力 | 第134-135页 |
| ·感染相关基因分布 | 第135页 |
| ·ActA与InlA序列分析 | 第135页 |
| ·主要毒力基因与调控基因表达水平测定 | 第135-136页 |
| ·PC-PLC的体外溶脂活性 | 第136页 |
| ·PrfA转座突变株的毒力基因表达水平变化 | 第136-137页 |
| ·PrfA氨基酸序列分析 | 第137-141页 |
| 第四节 单增李斯特菌谱系ⅢA-3弱毒株在进化中的地位 | 第141-166页 |
| 1.材料与方法 | 第141-143页 |
| ·菌株及其培养 | 第141-142页 |
| ·菌株M7的全基因组测序 | 第142页 |
| ·基因组序列分析 | 第142-143页 |
| 2. 结果 | 第143-166页 |
| ·菌株M7全基因组特点 | 第143-145页 |
| ·强毒株保守但弱毒株缺失基区分析 | 第145页 |
| ·弱毒株缺失的特征性基因区域 | 第145-153页 |
| ·弱毒株特异性基因分析 | 第153-154页 |
| ·弱毒株特异性基因在无害李斯特菌的分布 | 第154页 |
| ·李斯特菌第一毒力岛序列分析 | 第154-164页 |
| ·23S rRNA序列分析 | 第164-165页 |
| ·弱毒株在系统进化树中的进化地位 | 第165-166页 |
| 本章讨论 | 第166-174页 |
| 第三章 无害李斯特菌的亚群结构与分子进化 | 第174-213页 |
| 第一节 无害李斯特菌的亚群结构模型 | 第174-189页 |
| 1.材料与方法 | 第175-180页 |
| ·菌株及其培养 | 第175页 |
| ·生化鉴定 | 第175页 |
| ·内化素分型 | 第175页 |
| ·多位点序列分型及序列分析 | 第175-180页 |
| ·感染相关基因检测 | 第180页 |
| ·小鼠相对毒力试验 | 第180页 |
| ·基因登录号 | 第180页 |
| 2.结果 | 第180-189页 |
| ·生化反应特性 | 第180页 |
| ·内化素分型 | 第180-183页 |
| ·多位点序列分型 | 第183-184页 |
| ·进化分析 | 第184-187页 |
| ·无害李斯特菌亚群与分离来源的关系 | 第187-188页 |
| ·感染相关基因检测与小鼠毒力 | 第188-189页 |
| 第二节 无害李斯特菌亚群D的表型及代表性菌株基因组分析 | 第189-209页 |
| 1.材料与方法 | 第189-190页 |
| ·菌株及其培养 | 第189页 |
| ·血清分型 | 第189页 |
| ·生化鉴定 | 第189页 |
| ·细胞黏附力与细胞间扩散能力测定 | 第189-190页 |
| ·小鼠毒力试验 | 第190页 |
| ·菌株L43全基因组测序 | 第190页 |
| ·inlJ及其两翼区域分析 | 第190页 |
| 2.结果 | 第190-209页 |
| ·血清型与生化反应特征 | 第190-191页 |
| ·细胞黏附力与细胞间扩散能力 | 第191页 |
| ·小鼠毒力 | 第191页 |
| ·菌株L43基因组序列分析 | 第191-192页 |
| ·菌株L43缺失基因在单增李斯特菌中的分布 | 第192页 |
| ·菌株L43含有提前终止的InlJ | 第192-209页 |
| 本章讨论 | 第209-213页 |
| 第四章 单增李斯特菌酸应激功能基因组学研究 | 第213-238页 |
| 第一节 单增李斯特菌谷氨酸脱羧酶系统分析 | 第213-220页 |
| 1.材料与方法 | 第214-215页 |
| ·菌株及其培养 | 第214页 |
| ·亲水性分析 | 第214页 |
| ·谷氨酸脱羧酶分布分析 | 第214页 |
| ·酸性环境中谷氨酸脱羧酶基因转录水平分析 | 第214-215页 |
| 2.结果 | 第215-220页 |
| ·谷氨酸脱羧酶系统结构分析 | 第215-217页 |
| ·谷氨酸脱羧酶系统在李斯特菌中的分布 | 第217-218页 |
| ·谷氨酸脱羧酶系统在酸性环境中转录水平变化 | 第218-220页 |
| 第二节 精氨酸脱亚胺酶/鲱精胺脱亚胺酶系统对单增李斯特菌抗酸应激的影响 | 第220-230页 |
| 1.材料与方法 | 第221-223页 |
| ·菌株及其培养 | 第221页 |
| ·生物信息学分析 | 第221页 |
| ·酸性环境中lmo0036-1mo0043转录水平分析 | 第221-222页 |
| ·arcA、arcB、arcD、aguAl、aguA2缺失突变株构建 | 第222页 |
| ·不同缺失突变株在酸性环境中生长特性比较 | 第222-223页 |
| ·不同缺失突变株在胃液中的存活力测定 | 第223页 |
| 2.结果 | 第223-230页 |
| ·lmo0036-lm00043基因岛生物信息学分析 | 第223-224页 |
| ·arc家族在酸性环境中的转录水平变化 | 第224页 |
| ·aguA基因在酸性环境中的转录水平变化 | 第224页 |
| ·Imo0041与lmo0042在酸性环境中的转录水平变化 | 第224页 |
| ·arc与aguA缺失突变株在酸性BHI培养基中的生长特性 | 第224-227页 |
| ·arc与aguA缺失突变株在酸性MEM培养基中的生长特性 | 第227-228页 |
| ·arc与aguA缺失突变株在人工胃液中的存活率 | 第228-230页 |
| 第三节 精氨酸脱亚胺酶/鲱精胺脱亚胺酶系统对单增李斯特菌致病力的影响 | 第230-235页 |
| 1.材料与方法 | 第230-231页 |
| ·菌株及其培养 | 第230页 |
| ·细胞黏附力与侵袭力测定 | 第230页 |
| ·小鼠毒力试验 | 第230-231页 |
| 2.结果 | 第231-235页 |
| ·arc与aguA缺失突变株的细胞黏附力与侵袭力 | 第231页 |
| ·arcA缺失突变株对小鼠的毒力 | 第231页 |
| ·arcB缺失突变株对小鼠的毒力 | 第231-232页 |
| ·arcD缺失突变株对小鼠的毒力 | 第232-234页 |
| ·aguAl与aguA2缺失突变株对小鼠的毒力 | 第234-235页 |
| 本章讨论 | 第235-238页 |
| 第五章 单增李斯特菌精氨酸脱亚胺酶/鲱精胺脱亚胺酶系统功能蛋白的作用机制 | 第238-288页 |
| 第一节 精氨酸脱亚胺酶作用的分子机制 | 第238-252页 |
| 1.材料与方法 | 第239-241页 |
| ·菌株及其培养 | 第239页 |
| ·质粒与试剂 | 第239页 |
| ·生物信息学分析 | 第239-240页 |
| ·胃液中存活力测定 | 第240页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶原核表达、纯化与复性 | 第240页 |
| ·酶活显色反应(蛋白水平) | 第240-241页 |
| ·酶活显色反应(全菌水平) | 第241页 |
| ·高效液相色谱-质谱分析 | 第241页 |
| 2.结果 | 第241-252页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶系统进化树 | 第241-243页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶结构分析 | 第243页 |
| ·外源精氨酸对单增李斯特菌胃液中存活力的影响 | 第243-244页 |
| ·转运因子ArcD对精氨酸的转运作用 | 第244-246页 |
| ·原核表达精氨酸脱亚胺酶的SDS-PAGE分析 | 第246-247页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶活性分析 | 第247页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶酶促反应产物的高效液相色谱-质谱分析 | 第247-248页 |
| ·全菌水平精氨酸脱亚胺酶活性分析 | 第248-250页 |
| ·内源性精氨酸生成途径分析 | 第250-252页 |
| 第二节 鲱精胺脱亚胺酶作用的分子机制 | 第252-264页 |
| 1.材料与方法 | 第252-254页 |
| ·菌株及其培养 | 第252页 |
| ·质粒与试剂 | 第252-253页 |
| ·生物信息学分析 | 第253页 |
| ·胃液中存活力测定 | 第253页 |
| ·鲱精胺脱亚胺酶原核表达、纯化与复性 | 第253-254页 |
| ·氨甲酰腐胺合成 | 第254页 |
| ·酶活反应与高效液相色谱-质谱分析 | 第254页 |
| ·精氨酸脱羧酶活性测定 | 第254页 |
| 2.结果 | 第254-264页 |
| ·鲱精胺脱亚胺酶系统进化树 | 第254-256页 |
| ·鲱精胺脱亚胺酶结构分析 | 第256页 |
| ·外源鲱精胺对单增李斯特菌胃液中存活力的影响 | 第256-257页 |
| ·转运因子ArcD对鲱精胺的转运作用 | 第257-258页 |
| ·原核表达鲱精胺脱亚胺酶的SDS-PAGE分析 | 第258-259页 |
| ·氨甲酰腐胺的合成与结构验证 | 第259-260页 |
| ·鲱精胺脱亚胺酶酶促反应产物的高效液相色谱-质谱分析 | 第260-261页 |
| ·精氨酸脱羧酶活性测定 | 第261页 |
| ·精氨酸脱羧酶的分布 | 第261-264页 |
| 第三节 氨甲酰转移酶作用的分子机制 | 第264-278页 |
| 1.材料与方法 | 第264-268页 |
| ·菌株及其培养 | 第264-265页 |
| ·质粒与试剂 | 第265页 |
| ·生物信息学分析 | 第265-266页 |
| ·氨甲酰转移酶的原核表达与纯化 | 第266页 |
| ·鸟氨酸氨甲酰转移酶异化反应方向酶活测定 | 第266-267页 |
| ·鸟氨酸氨甲酰转移酶同化反应方向酶活测定 | 第267页 |
| ·腐胺氨甲酰转移酶异化反应方向酶活测定 | 第267-268页 |
| ·腐胺氨甲酰转移酶同化反应方向酶活测定 | 第268页 |
| ·高效液相色谱-质谱分析 | 第268页 |
| 2.结果 | 第268-278页 |
| ·氨甲酰转移酶结构分析 | 第268-269页 |
| ·原核表达氨甲酰转移酶SDS-PAGE分析 | 第269-270页 |
| ·鸟氨酸氨甲酰转移酶异化反应活性 | 第270-273页 |
| ·鸟氨酸氨甲酰转移酶同化反应活性 | 第273-274页 |
| ·腐胺氨甲酰转移酶异化反应活性 | 第274-276页 |
| ·腐胺氨甲酰转移酶同化反应活性 | 第276-278页 |
| 第四节 精氨酸脱亚胺酶基因岛的调控 | 第278-284页 |
| 1.材料与方法 | 第278-279页 |
| ·菌株及其培养 | 第278页 |
| ·生物信息学分析 | 第278页 |
| ·lmo0041与argR缺失突变株构建 | 第278-279页 |
| ·细菌的酸应激及总RNA提取与cDNA反转录 | 第279页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶基因岛内基因的转录水平分析 | 第279页 |
| ·SigB与PrfA结合位点分析 | 第279页 |
| 2.结果 | 第279-284页 |
| ·Lmo0041与ArgR亲水性分析 | 第279-280页 |
| ·lmo0041缺失突变株中精氨酸脱亚胺酶基因岛的转录水平分析 | 第280页 |
| ·argR缺失突变株中精氨酸脱亚胺酶基因岛的转录水平分析 | 第280-281页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶基因岛SigB结合位点分析 | 第281-282页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶基因岛PrfA结合位点分析 | 第282-284页 |
| 本章讨论 | 第284-288页 |
| 全文结论 | 第288-290页 |
| 创新点 | 第290-291页 |
| 展望 | 第291-292页 |
| 参考文献 | 第292-309页 |
| 名词缩写 | 第309-310页 |
| 作者简介 | 第310-311页 |
| 攻读博士期间的科研成果 | 第311-315页 |
| 后记 | 第315-316页 |
