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MYBL2在食管鳞癌细胞增殖及迁移侵袭中的作用及机制探讨

摘要第4-13页
ABSTRACT第13-22页
英文缩略词表第31-33页
前言第33-40页
    参考文献第37-40页
第一部分 基于高通量多组学数据分析MYBL2在食管癌中的表达及临床意义第40-49页
    1 材料和方法第40-41页
        1.1 数据来源第40-41页
        1.2 数据分析方法第41页
            1.2.1 c Bio Portal数据分析第41页
            1.2.2 Oncomine数据分析第41页
            1.2.3 Linked Omics数据分析第41页
    2 结果第41-45页
        2.1 MYBL2 基因在食管癌中的突变情况第41-43页
        2.2 MYBL2 MRNA在食管正常组织及食管癌中的表达情况第43-44页
        2.3 MYBL2 MRNA基因在食管癌中的表达变化与各临床指标间的关系第44-45页
    3 讨论第45-46页
    4 小结第46-47页
    参考文献第47-49页
第二部分 MYBL2蛋白在食管鳞癌中的表达及与临床病理特征和预后的关系第49-62页
    1 材料与方法第49-52页
        1.1 实验材料第49-50页
            1.1.1 标本来源第49-50页
            1.1.2 主要实验仪器及耗材第50页
            1.1.3 主要试剂第50页
            1.1.4 常用辅助试剂第50页
        1.2 实验方法第50-52页
            1.2.1 免疫组化染色第50-52页
            1.2.2 结果判定第52页
        1.3 统计方法第52页
    2 实验结果第52-58页
        2.1 MYBL2 蛋白在人食管鳞癌与癌旁组织中的表达第52-53页
        2.2 MYBL2 蛋白表达与食管鳞癌各临床病理特征的关系第53-54页
        2.3 MYBL2 蛋白表达与食管鳞癌预后的生存分析第54-58页
            2.3.1 Log-Rank法对食管鳞癌预后因素的单因素分析第54-57页
            2.3.2 食管鳞癌预后因素的COX单因素回归分析第57页
            2.3.3 食管鳞癌预后因素的多因素回归分析第57-58页
    3 讨论第58-60页
    4 小结第60页
    参考文献第60-62页
第三部分 MYBL2基因沉默及过表达对食管鳞癌细胞增殖及迁移侵袭的影响第62-97页
    1 材料与方法第62-77页
        1.1 实验材料第62-67页
            1.1.1 细胞系第62-63页
            1.1.2 主要实验仪器第63-64页
            1.1.3 主要实验试剂第64-65页
            1.1.4 质粒参考第65页
            1.1.5 实验试剂配制第65-67页
        1.2 实验方法第67-77页
            1.2.1 细胞培养第67-68页
            1.2.2 细胞处理(AG490 刺激)第68页
            1.2.3 食管癌细胞株MYBL2 shRNA转染第68-69页
            1.2.4 食管癌细胞株的慢病毒感染和稳定细胞系的筛选第69-70页
            1.2.5 Real-time荧光定量PCR第70-72页
            1.2.6 Western blot第72-73页
            1.2.7 CCK8 法检测细胞增殖第73-74页
            1.2.8 EdU法检测细胞增殖第74-75页
            1.2.9 流式细胞仪检测细胞周期第75-77页
        1.3 统计方法第77页
    2 结果第77-89页
        2.1 食管鳞癌MYBL2 shRNA稳转株及MYBL2 过表达稳转株的构建第77-80页
            2.1.1 高/低表达MYBL2 的人食管鳞癌细胞株筛选第77-78页
            2.1.2 MYBL2 有效sh RNA片段的筛选第78页
            2.1.3 食管鳞癌MYBL2 shRNA稳转株及MYBL2 过表达稳转株的构建第78-79页
            2.1.4 食管鳞癌MYBL2shRNA稳转株及MYBL2 过表达稳转株的鉴定第79-80页
        2.2 MYBL2 基因对食管鳞癌细胞增殖影响第80-84页
            2.2.1 CCK8 法检测MYBL2 对细胞活力的影响第80页
            2.2.2 EdU检测MYBL2 对细胞增殖的影响第80-82页
            2.2.3 流式细胞周期法检测MYBL2 干扰对细胞周期的影响第82页
            2.2.4 MYBL2 干扰及过表达分别对食管鳞癌细胞周期相关基因的影响第82-83页
            2.2.5 食管鳞癌患者中MYBL2 与细胞周期相关蛋白CDK1,CyclinB1及P21 的相关性分析第83-84页
        2.3 MYBL2 基因对食管鳞癌细胞侵袭迁移及EMT的影响第84-89页
            2.3.1 细胞划痕实验检测细胞迁移能力的变化第84-85页
            2.3.2 Transwell小室实验检测细胞侵袭能力的变化第85-86页
            2.3.3 MYBL2 基因对食管鳞癌细胞中EMT分子标记物E-cadherin及 Vimentin表达的影响第86-88页
            2.3.4 食管鳞癌患者中MYBL2与EMT分子标记物E-cadherin及 Vimentin的相关性分析第88页
            2.3.5 AG490 处理对MYBL2 介导的食管鳞癌细胞EMT过程的影响第88-89页
    3 讨论第89-94页
    4 小结第94页
    参考文献第94-97页
第四部分 MYBL2 阻断对裸鼠食管鳞癌移植瘤生长及增殖的影响第97-109页
    1 材料与方法第97-99页
        1.1 实验材料第97-98页
            1.1.1 细胞系第97页
            1.1.2 实验动物第97-98页
            1.1.3 主要实验仪器及试剂第98页
        1.2 实验方法第98-99页
            1.2.1 细胞准备第98页
            1.2.2 动物分组及成瘤第98页
            1.2.3 观察瘤体及瘤重第98页
            1.2.4 组织标本的取材及固定第98-99页
            1.2.5 HE染色第99页
            1.2.6 免疫组化第99页
        1.3 统计方法第99页
    2 结果第99-106页
        2.1 MYBL2 抑制对裸鼠食管鳞癌移植瘤体积的影响第99-101页
        2.2 MYBL2 抑制对裸鼠食管鳞癌移植瘤瘤重及肿瘤抑瘤率的影响第101页
        2.3 MYBL2 抑制对裸鼠食管鳞癌移植瘤细胞形态的影响第101-102页
        2.4 MYBL2 抑制对裸鼠食管鳞癌移植瘤MYBL2 表达的影响第102-103页
        2.5 MYBL2 抑制对裸鼠食管鳞癌移植瘤中Ki67 蛋白的表达的影响第103-104页
        2.6 MYBL2 抑制对裸鼠食管鳞癌移植瘤中CDK1和Cyclin B1 蛋白的表达影响第104-105页
        2.7 MYBL2 抑制对裸鼠食管鳞癌移植瘤中E-cadherin和 Vimentin蛋白的表达影响第105-106页
    3 讨论第106-108页
        3.1 MYBL2 抑制对裸鼠食管鳞癌移植瘤生长状态的影响第106-107页
        3.2 MYBL2抑制对裸鼠食管鳞癌移植瘤中MYBL2、Ki67、CDK1和Cyclin B1及EMT分子标记物的影响第107-108页
    4 小结第108页
    参考文献第108-109页
第五部分 miR-29c-3p靶向MYBL2 基因调控食管鳞癌增殖及迁移侵袭的机制研究第109-133页
    1 材料与方法第110-116页
        1.1 实验材料第110-112页
            1.1.1 细胞系第110页
            1.1.2 主要实验仪器第110-111页
            1.1.3 主要实验试剂第111页
            1.1.4 引物及质粒参考第111-112页
            1.1.5 主要实验试剂配制第112页
        1.2 实验方法第112-116页
            1.2.1 细胞培养第112页
            1.2.2 MYBL2 的靶miRNAs预测第112页
            1.2.3 细胞转染第112-113页
            1.2.4 miRNA Real-time荧光定量PCR第113-114页
            1.2.5 Western blot第114-115页
            1.2.6 双荧光素酶报告基因实验第115页
            1.2.7 CCK8 法检测细胞增殖第115-116页
            1.2.8 EdU法检测细胞增殖第116页
    2 结果第116-128页
        2.1 靶向调控MYBL2的miRNAs筛选第116-119页
            2.1.1 miR-29c-3p在食管鳞癌组织中表达下调第116-117页
            2.1.2 miR-29c-3p与食管癌患者预后的关系及与MYBL2 的相关性第117-118页
            2.1.3 靶向调控MYBL2的miRNAs预测结果第118-119页
        2.2 miR-29c-3p通过与MYBL2的3’UTR端结合直接调控MYBL2 的表达第119-121页
            2.2.1 miR-29c-3p表达变化对MYBL2 mRNA和 MYBL2 蛋白表达的影响第119-120页
            2.2.2 荧光素酶表达实验验证miR-29c-3p对 MYBL2 的靶向调控第120-121页
        2.3 miR-29c-3p表达变化对食管鳞癌细胞株的增殖,迁移及侵袭第121-124页
            2.3.1 miR-29c-3p表达变化对细胞增殖活性的影响第121-123页
            2.3.2 miR-29c-3p表达变化对细胞迁移及侵袭的影响第123-124页
        2.4 miR-29c-3p通过调控MYBL2 的表达介导食管鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭的过程第124-128页
            2.4.1 过表达MYBL2 减弱miR-29c-3p Mimics对 MYBL2 的抑制作用第124-125页
            2.4.2 过表达MYBL2 减弱miR-29c-3p对细胞增殖的抑制作用第125-126页
            2.4.3 过表达MYBL2 减弱miR-29c-3p对细胞迁移侵袭的抑制作用第126-128页
    3 讨论第128-130页
    4 小结第130页
    参考文献第130-133页
全文结论第133-134页
综述第134-154页
    1 MYBL2 简介第134-135页
    2 MYBL2 在细胞周期调节中的作用第135-138页
    3 MYBL2 在调控细胞凋亡中的作用第138-140页
    4 MYBL2 在细胞衰老中的作用第140页
    5 MYBL2在分化和维持干细胞特性方面的作用第140-141页
    6 MYBL2 与肿瘤第141-145页
        6.1 肿瘤中MYBL2 表达失调的机制第141-142页
        6.2 MYBL2 促进肿瘤细胞增殖第142页
        6.3 MYBL2 与侵袭和转移第142-143页
        6.4 MYBL2 与肿瘤治疗抵抗第143页
        6.5 MYBL2 与肿瘤患者预后第143-144页
        6.6 肿瘤中microRNAs对 MYBL2 的转录后调控第144-145页
    7 小结第145-146页
    参考文献第146-154页
个人简历及在学期间发表的学术论文第154-155页
致谢第155页

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