摘要 | 第4-13页 |
ABSTRACT | 第13-22页 |
英文缩略词表 | 第31-33页 |
前言 | 第33-40页 |
参考文献 | 第37-40页 |
第一部分 基于高通量多组学数据分析MYBL2在食管癌中的表达及临床意义 | 第40-49页 |
1 材料和方法 | 第40-41页 |
1.1 数据来源 | 第40-41页 |
1.2 数据分析方法 | 第41页 |
1.2.1 c Bio Portal数据分析 | 第41页 |
1.2.2 Oncomine数据分析 | 第41页 |
1.2.3 Linked Omics数据分析 | 第41页 |
2 结果 | 第41-45页 |
2.1 MYBL2 基因在食管癌中的突变情况 | 第41-43页 |
2.2 MYBL2 MRNA在食管正常组织及食管癌中的表达情况 | 第43-44页 |
2.3 MYBL2 MRNA基因在食管癌中的表达变化与各临床指标间的关系 | 第44-45页 |
3 讨论 | 第45-46页 |
4 小结 | 第46-47页 |
参考文献 | 第47-49页 |
第二部分 MYBL2蛋白在食管鳞癌中的表达及与临床病理特征和预后的关系 | 第49-62页 |
1 材料与方法 | 第49-52页 |
1.1 实验材料 | 第49-50页 |
1.1.1 标本来源 | 第49-50页 |
1.1.2 主要实验仪器及耗材 | 第50页 |
1.1.3 主要试剂 | 第50页 |
1.1.4 常用辅助试剂 | 第50页 |
1.2 实验方法 | 第50-52页 |
1.2.1 免疫组化染色 | 第50-52页 |
1.2.2 结果判定 | 第52页 |
1.3 统计方法 | 第52页 |
2 实验结果 | 第52-58页 |
2.1 MYBL2 蛋白在人食管鳞癌与癌旁组织中的表达 | 第52-53页 |
2.2 MYBL2 蛋白表达与食管鳞癌各临床病理特征的关系 | 第53-54页 |
2.3 MYBL2 蛋白表达与食管鳞癌预后的生存分析 | 第54-58页 |
2.3.1 Log-Rank法对食管鳞癌预后因素的单因素分析 | 第54-57页 |
2.3.2 食管鳞癌预后因素的COX单因素回归分析 | 第57页 |
2.3.3 食管鳞癌预后因素的多因素回归分析 | 第57-58页 |
3 讨论 | 第58-60页 |
4 小结 | 第60页 |
参考文献 | 第60-62页 |
第三部分 MYBL2基因沉默及过表达对食管鳞癌细胞增殖及迁移侵袭的影响 | 第62-97页 |
1 材料与方法 | 第62-77页 |
1.1 实验材料 | 第62-67页 |
1.1.1 细胞系 | 第62-63页 |
1.1.2 主要实验仪器 | 第63-64页 |
1.1.3 主要实验试剂 | 第64-65页 |
1.1.4 质粒参考 | 第65页 |
1.1.5 实验试剂配制 | 第65-67页 |
1.2 实验方法 | 第67-77页 |
1.2.1 细胞培养 | 第67-68页 |
1.2.2 细胞处理(AG490 刺激) | 第68页 |
1.2.3 食管癌细胞株MYBL2 shRNA转染 | 第68-69页 |
1.2.4 食管癌细胞株的慢病毒感染和稳定细胞系的筛选 | 第69-70页 |
1.2.5 Real-time荧光定量PCR | 第70-72页 |
1.2.6 Western blot | 第72-73页 |
1.2.7 CCK8 法检测细胞增殖 | 第73-74页 |
1.2.8 EdU法检测细胞增殖 | 第74-75页 |
1.2.9 流式细胞仪检测细胞周期 | 第75-77页 |
1.3 统计方法 | 第77页 |
2 结果 | 第77-89页 |
2.1 食管鳞癌MYBL2 shRNA稳转株及MYBL2 过表达稳转株的构建 | 第77-80页 |
2.1.1 高/低表达MYBL2 的人食管鳞癌细胞株筛选 | 第77-78页 |
2.1.2 MYBL2 有效sh RNA片段的筛选 | 第78页 |
2.1.3 食管鳞癌MYBL2 shRNA稳转株及MYBL2 过表达稳转株的构建 | 第78-79页 |
2.1.4 食管鳞癌MYBL2shRNA稳转株及MYBL2 过表达稳转株的鉴定 | 第79-80页 |
2.2 MYBL2 基因对食管鳞癌细胞增殖影响 | 第80-84页 |
2.2.1 CCK8 法检测MYBL2 对细胞活力的影响 | 第80页 |
2.2.2 EdU检测MYBL2 对细胞增殖的影响 | 第80-82页 |
2.2.3 流式细胞周期法检测MYBL2 干扰对细胞周期的影响 | 第82页 |
2.2.4 MYBL2 干扰及过表达分别对食管鳞癌细胞周期相关基因的影响 | 第82-83页 |
2.2.5 食管鳞癌患者中MYBL2 与细胞周期相关蛋白CDK1,CyclinB1及P21 的相关性分析 | 第83-84页 |
2.3 MYBL2 基因对食管鳞癌细胞侵袭迁移及EMT的影响 | 第84-89页 |
2.3.1 细胞划痕实验检测细胞迁移能力的变化 | 第84-85页 |
2.3.2 Transwell小室实验检测细胞侵袭能力的变化 | 第85-86页 |
2.3.3 MYBL2 基因对食管鳞癌细胞中EMT分子标记物E-cadherin及 Vimentin表达的影响 | 第86-88页 |
2.3.4 食管鳞癌患者中MYBL2与EMT分子标记物E-cadherin及 Vimentin的相关性分析 | 第88页 |
2.3.5 AG490 处理对MYBL2 介导的食管鳞癌细胞EMT过程的影响 | 第88-89页 |
3 讨论 | 第89-94页 |
4 小结 | 第94页 |
参考文献 | 第94-97页 |
第四部分 MYBL2 阻断对裸鼠食管鳞癌移植瘤生长及增殖的影响 | 第97-109页 |
1 材料与方法 | 第97-99页 |
1.1 实验材料 | 第97-98页 |
1.1.1 细胞系 | 第97页 |
1.1.2 实验动物 | 第97-98页 |
1.1.3 主要实验仪器及试剂 | 第98页 |
1.2 实验方法 | 第98-99页 |
1.2.1 细胞准备 | 第98页 |
1.2.2 动物分组及成瘤 | 第98页 |
1.2.3 观察瘤体及瘤重 | 第98页 |
1.2.4 组织标本的取材及固定 | 第98-99页 |
1.2.5 HE染色 | 第99页 |
1.2.6 免疫组化 | 第99页 |
1.3 统计方法 | 第99页 |
2 结果 | 第99-106页 |
2.1 MYBL2 抑制对裸鼠食管鳞癌移植瘤体积的影响 | 第99-101页 |
2.2 MYBL2 抑制对裸鼠食管鳞癌移植瘤瘤重及肿瘤抑瘤率的影响 | 第101页 |
2.3 MYBL2 抑制对裸鼠食管鳞癌移植瘤细胞形态的影响 | 第101-102页 |
2.4 MYBL2 抑制对裸鼠食管鳞癌移植瘤MYBL2 表达的影响 | 第102-103页 |
2.5 MYBL2 抑制对裸鼠食管鳞癌移植瘤中Ki67 蛋白的表达的影响 | 第103-104页 |
2.6 MYBL2 抑制对裸鼠食管鳞癌移植瘤中CDK1和Cyclin B1 蛋白的表达影响 | 第104-105页 |
2.7 MYBL2 抑制对裸鼠食管鳞癌移植瘤中E-cadherin和 Vimentin蛋白的表达影响 | 第105-106页 |
3 讨论 | 第106-108页 |
3.1 MYBL2 抑制对裸鼠食管鳞癌移植瘤生长状态的影响 | 第106-107页 |
3.2 MYBL2抑制对裸鼠食管鳞癌移植瘤中MYBL2、Ki67、CDK1和Cyclin B1及EMT分子标记物的影响 | 第107-108页 |
4 小结 | 第108页 |
参考文献 | 第108-109页 |
第五部分 miR-29c-3p靶向MYBL2 基因调控食管鳞癌增殖及迁移侵袭的机制研究 | 第109-133页 |
1 材料与方法 | 第110-116页 |
1.1 实验材料 | 第110-112页 |
1.1.1 细胞系 | 第110页 |
1.1.2 主要实验仪器 | 第110-111页 |
1.1.3 主要实验试剂 | 第111页 |
1.1.4 引物及质粒参考 | 第111-112页 |
1.1.5 主要实验试剂配制 | 第112页 |
1.2 实验方法 | 第112-116页 |
1.2.1 细胞培养 | 第112页 |
1.2.2 MYBL2 的靶miRNAs预测 | 第112页 |
1.2.3 细胞转染 | 第112-113页 |
1.2.4 miRNA Real-time荧光定量PCR | 第113-114页 |
1.2.5 Western blot | 第114-115页 |
1.2.6 双荧光素酶报告基因实验 | 第115页 |
1.2.7 CCK8 法检测细胞增殖 | 第115-116页 |
1.2.8 EdU法检测细胞增殖 | 第116页 |
2 结果 | 第116-128页 |
2.1 靶向调控MYBL2的miRNAs筛选 | 第116-119页 |
2.1.1 miR-29c-3p在食管鳞癌组织中表达下调 | 第116-117页 |
2.1.2 miR-29c-3p与食管癌患者预后的关系及与MYBL2 的相关性 | 第117-118页 |
2.1.3 靶向调控MYBL2的miRNAs预测结果 | 第118-119页 |
2.2 miR-29c-3p通过与MYBL2的3’UTR端结合直接调控MYBL2 的表达 | 第119-121页 |
2.2.1 miR-29c-3p表达变化对MYBL2 mRNA和 MYBL2 蛋白表达的影响 | 第119-120页 |
2.2.2 荧光素酶表达实验验证miR-29c-3p对 MYBL2 的靶向调控 | 第120-121页 |
2.3 miR-29c-3p表达变化对食管鳞癌细胞株的增殖,迁移及侵袭 | 第121-124页 |
2.3.1 miR-29c-3p表达变化对细胞增殖活性的影响 | 第121-123页 |
2.3.2 miR-29c-3p表达变化对细胞迁移及侵袭的影响 | 第123-124页 |
2.4 miR-29c-3p通过调控MYBL2 的表达介导食管鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭的过程 | 第124-128页 |
2.4.1 过表达MYBL2 减弱miR-29c-3p Mimics对 MYBL2 的抑制作用 | 第124-125页 |
2.4.2 过表达MYBL2 减弱miR-29c-3p对细胞增殖的抑制作用 | 第125-126页 |
2.4.3 过表达MYBL2 减弱miR-29c-3p对细胞迁移侵袭的抑制作用 | 第126-128页 |
3 讨论 | 第128-130页 |
4 小结 | 第130页 |
参考文献 | 第130-133页 |
全文结论 | 第133-134页 |
综述 | 第134-154页 |
1 MYBL2 简介 | 第134-135页 |
2 MYBL2 在细胞周期调节中的作用 | 第135-138页 |
3 MYBL2 在调控细胞凋亡中的作用 | 第138-140页 |
4 MYBL2 在细胞衰老中的作用 | 第140页 |
5 MYBL2在分化和维持干细胞特性方面的作用 | 第140-141页 |
6 MYBL2 与肿瘤 | 第141-145页 |
6.1 肿瘤中MYBL2 表达失调的机制 | 第141-142页 |
6.2 MYBL2 促进肿瘤细胞增殖 | 第142页 |
6.3 MYBL2 与侵袭和转移 | 第142-143页 |
6.4 MYBL2 与肿瘤治疗抵抗 | 第143页 |
6.5 MYBL2 与肿瘤患者预后 | 第143-144页 |
6.6 肿瘤中microRNAs对 MYBL2 的转录后调控 | 第144-145页 |
7 小结 | 第145-146页 |
参考文献 | 第146-154页 |
个人简历及在学期间发表的学术论文 | 第154-155页 |
致谢 | 第155页 |