| 缩略语表 | 第6-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 文献回顾 | 第14-22页 |
| 第一部分 抗Aβ抗体融合蛋白的真核表达及功能研究 | 第22-41页 |
| 1 实验材料和主要仪器 | 第23-24页 |
| 1.1 实验材料 | 第23页 |
| 1.2 主要仪器 | 第23-24页 |
| 2 方法 | 第24-32页 |
| 2.1 抗Aβ 抗体融合蛋白的序列设计与合成 | 第24-25页 |
| 2.2 真核表达载体的构建 | 第25-27页 |
| 2.3 真核瞬时表达 | 第27页 |
| 2.4 细胞收获液的纯化与检测 | 第27-30页 |
| 2.5 间接ELISA法检测表达产物与Aβ1-42 的特异性结合 | 第30-31页 |
| 2.6 表达产物刺激U937细胞分泌TNFα 的作用研究 | 第31-32页 |
| 2.7 表达产物对Aβ1-42 诱导SY5Y细胞损伤的拮抗作用 | 第32页 |
| 3 结果 | 第32-38页 |
| 3.1 SDS-PAGE检测 | 第32-34页 |
| 3.2 SEC-HPLC检测结果 | 第34-35页 |
| 3.3 表达上清和纯化蛋白的定量 | 第35页 |
| 3.4 间接ELISA法检测与Aβ1-42 的特异性结合 | 第35-36页 |
| 3.5 scFv-Fc-SUMO3和scFv-Fc刺激U937细胞分泌TNFα | 第36-37页 |
| 3.6 三种蛋白对Aβ1-42 诱导SY5Y细胞损伤的拮抗作用 | 第37-38页 |
| 4 讨论 | 第38-41页 |
| 第二部分 重组AAV9病毒的包装生产与鉴定 | 第41-49页 |
| 1 实验材料和主要仪器 | 第41-42页 |
| 1.1 实验材料 | 第41-42页 |
| 1.2 主要仪器 | 第42页 |
| 2 方法 | 第42-46页 |
| 2.1 骨架质粒的克隆 | 第42-43页 |
| 2.2 重组AAV9病毒的包装生产与纯化 | 第43-44页 |
| 2.3 重组AAV9病毒的目的基因鉴定 | 第44页 |
| 2.4 重组AAV9病毒的滴度测定 | 第44-46页 |
| 3 结果 | 第46-47页 |
| 3.1 重组AAV9病毒的目的基因鉴定 | 第46页 |
| 3.2 重组AAV9病毒的滴度测定 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-49页 |
| 第三部分 重组AAV9病毒的体内外表达研究及初步药效评价 | 第49-69页 |
| 1 实验材料和主要仪器 | 第50页 |
| 1.1 实验材料 | 第50页 |
| 1.2 主要仪器 | 第50页 |
| 1.3 实验动物 | 第50页 |
| 2 方法 | 第50-54页 |
| 2.1 重组AAV9病毒的体外表达 | 第50-51页 |
| 2.2 重组AAV9病毒的体内表达 | 第51-52页 |
| 2.3 Western Blot检测目的蛋白的表达 | 第52-53页 |
| 2.4 重组AAV9病毒的体外药效研究 | 第53页 |
| 2.5 重组AAV9病毒的体内药效研究 | 第53-54页 |
| 3 结果 | 第54-66页 |
| 3.1 重组AAV9病毒的体内外表达检测 | 第54-63页 |
| 3.2 表达产物的Western Blot检测 | 第63-64页 |
| 3.3 重组AAV9病毒的体外药效研究 | 第64-65页 |
| 3.4 重组AAV9病毒的体内药效研究 | 第65-66页 |
| 4 讨论 | 第66-69页 |
| 第四部分 IL-5 和IL-5/IL-5Rα 靶点治疗性抗体生物学活性报告基因法的建立 | 第69-86页 |
| 1 实验材料和主要仪器 | 第70-71页 |
| 1.1 实验材料 | 第70-71页 |
| 1.2 主要仪器 | 第71页 |
| 2 方法 | 第71-76页 |
| 2.1 细胞培养 | 第71-72页 |
| 2.1.1 细胞复苏 | 第71页 |
| 2.1.2 细胞冻存 | 第71-72页 |
| 2.1.3 细胞培养 | 第72页 |
| 2.2 IL-5 依赖的TF1IL-5 细胞系筛选 | 第72页 |
| 2.3 流式细胞术分析 | 第72页 |
| 2.4 TF1IL-5 细胞潮霉素B筛选浓度的确定 | 第72页 |
| 2.5 TF1IL-5/STAT5-RE-luc2P细胞的构建 | 第72-73页 |
| 2.6 TF1IL-5/STAT5-RE-luc2P报告基因法方法优化 | 第73-74页 |
| 2.7 变性抗体的制备 | 第74页 |
| 2.8 增殖抑制法 | 第74-75页 |
| 2.9 方法学验证 | 第75-76页 |
| 2.10 报告基因法评价IL-5Rα 靶点抗体药物生物学活性 | 第76页 |
| 3 结果 | 第76-83页 |
| 3.1 TF1IL-5 细胞IL-5Rα 的表达 | 第76-77页 |
| 3.2 单克隆分离 | 第77页 |
| 3.3 方法建立及优化 | 第77-80页 |
| 3.4 方法验证 | 第80-83页 |
| 3.5 报告基因法评价IL-5Rα 靶点抗体药物生物学活性 | 第83页 |
| 4 讨论 | 第83-86页 |
| 小结 | 第86-90页 |
| 结论 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-100页 |
| 附录 研究内容已发表论文 | 第100-101页 |
| 个人简历和研究成果 | 第101-105页 |
| 致谢 | 第105-107页 |
| 附录 | 第107页 |
