| 中文摘要 | 第4-8页 |
| ABSTRACT | 第8-12页 |
| 英文缩略词表 | 第16-18页 |
| 绪论 | 第18-24页 |
| 1 帕金森病及其相关机制 | 第18-21页 |
| 2 MIRNA的概述 | 第21-23页 |
| 3 本研究主要内容 | 第23-24页 |
| 第一部分 MIR-124和MIR-146A在 MPTP帕金森病小鼠模型中的表达 | 第24-41页 |
| 1 前言 | 第24-25页 |
| 2 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.1 实验动物与细胞 | 第25-26页 |
| 2.2 主要试剂及仪器 | 第26-27页 |
| 3 实验方法 | 第27-33页 |
| 3.1 帕金森病小鼠模型的构建及标本的收集 | 第27-28页 |
| 3.2 细胞培养及SH-SY5Y细胞和BV2 细胞的处理 | 第28-29页 |
| 3.3 QRT-PCR实验 | 第29-31页 |
| 3.3.1 总RNA提取 | 第29页 |
| 3.3.2 体外逆转录 | 第29-30页 |
| 3.3.3 实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR) | 第30-31页 |
| 3.4 原位杂交联合组织免疫荧光染色 | 第31-33页 |
| 3.4.1 溶液配置 | 第31页 |
| 3.4.2 组织切片原位杂交联合免疫荧光染色 | 第31-33页 |
| 3.5 统计学分析 | 第33页 |
| 4 结果 | 第33-38页 |
| 4.1 MIR-124和MIR-146A在帕金森病小鼠中脑组织中的表达水平 | 第33-35页 |
| 4.2 MIR-124和MIR-146A在 MPTP帕金森病小鼠中脑组织中的表达强度 | 第35-36页 |
| 4.3 MIR-124和MIR-146A在体外细胞中的表达 | 第36-38页 |
| 5 讨论 | 第38-40页 |
| 6 小结 | 第40-41页 |
| 第二部分 MIR-124和MIR-146A的靶基因的鉴定 | 第41-61页 |
| 1 前言 | 第41-42页 |
| 2 实验材料 | 第42页 |
| 3 实验方法 | 第42-52页 |
| 3.1 生物信息学方法 | 第42页 |
| 3.2 荧光素酶报告基因实验 | 第42-48页 |
| 3.2.1 靶基因3'-UTR目的片段的合成 | 第42-43页 |
| 3.2.2 重组载体的构建及鉴定 | 第43-47页 |
| 3.2.3 细胞转染 | 第47-48页 |
| 3.2.4 荧光素酶活性的检测 | 第48页 |
| 3.3 MIRNA对内源性靶基因的调控 | 第48-52页 |
| 3.3.1 miRNA转染细胞 | 第48页 |
| 3.3.2 qRT-PCR实验 | 第48-49页 |
| 3.3.3 Western blot实验 | 第49-52页 |
| 3.4 统计学分析 | 第52页 |
| 4 结果 | 第52-59页 |
| 4.1 生物信息学软件预测结果 | 第52-53页 |
| 4.2 荧光素酶报告系统验证MIRNA与靶基因3'-非编码区的结合 | 第53-57页 |
| 4.2.1 psiCHECKTM-2 重组质粒载体的构建 | 第53-54页 |
| 4.2.2 重组载体质粒的筛选与鉴定 | 第54-56页 |
| 4.2.3 荧光素酶相对活性的检测 | 第56-57页 |
| 4.3 MIR-124和MIR-146A对内源性靶基因的调控 | 第57-59页 |
| 5 讨论 | 第59-60页 |
| 6 小结 | 第60-61页 |
| 第三部分 MIR124和MIR-146A参与帕金森病发生的作用机制 | 第61-76页 |
| 1 前言 | 第61-62页 |
| 2 实验材料 | 第62页 |
| 3 实验方法 | 第62-65页 |
| 3.1 侧脑室给药及取材 | 第62页 |
| 3.2 TUNEL染色联合荧光免疫组织化学 | 第62-63页 |
| 3.3 线粒体蛋白的提取 | 第63-64页 |
| 3.4 QRT-PCR及 WESTERN-BLOT实验 | 第64页 |
| 3.5 ELISA检测小鼠中脑组织中炎症相关因子的表达 | 第64-65页 |
| 3.5.1 样本品制备 | 第64页 |
| 3.5.2 操作步骤 | 第64-65页 |
| 4 结果 | 第65-73页 |
| 4.1 MPTP帕金森病模型小鼠中脑组织中BIM的表达 | 第65-66页 |
| 4.2 相关凋亡因子的表达 | 第66-67页 |
| 4.3 MPTP帕金森病模型小鼠中脑组织中IRAK1 的表达变化 | 第67-69页 |
| 4.4 免疫炎症相关因子的表达 | 第69-71页 |
| 4.5 MPTP帕金森病小鼠黑质致密部神经元的凋亡情况 | 第71-73页 |
| 5 讨论 | 第73-75页 |
| 6 小结 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-83页 |
| 综述 神经退行性疾病中MIRNA的研究进展 | 第83-105页 |
| 参考文献 | 第99-105页 |
| 个人简历 | 第105页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及研究成果 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
