| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-26页 |
| 1.1 核受体 | 第11-17页 |
| 1.1.1 核受体的分类 | 第11-12页 |
| 1.1.2 核受体的功能结构域 | 第12-14页 |
| 1.1.3 核受体与疾病 | 第14-17页 |
| 1.2 核输入受体IMPα | 第17-21页 |
| 1.2.1 核质转运过程 | 第17-18页 |
| 1.2.2 核输入受体IMP α的亚型与功能结构域 | 第18-20页 |
| 1.2.3 核定位信号NLS | 第20-21页 |
| 1.3 蛋白质结构生物学 | 第21-23页 |
| 1.3.1 结构生物学 | 第21-22页 |
| 1.3.2 蛋白质晶体结构 | 第22页 |
| 1.3.3 蛋白质结构解析 | 第22-23页 |
| 1.4 本研究的目的与实验设计思路 | 第23-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-41页 |
| 2.1 常用试剂、耗材与仪器 | 第26-29页 |
| 2.1.1 常用试剂与耗材 | 第26-28页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第28-29页 |
| 2.2 分子克隆 | 第29-33页 |
| 2.2.1 质粒载体 | 第29页 |
| 2.2.2 蛋白表达质粒构建 | 第29-33页 |
| 2.3 His标签蛋白沉淀实验 | 第33-34页 |
| 2.4 重组蛋白的表达与纯化 | 第34-36页 |
| 2.4.1 融合蛋白的表达 | 第34页 |
| 2.4.2 融合蛋白的纯化 | 第34-35页 |
| 2.4.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第35-36页 |
| 2.5 结晶 | 第36-38页 |
| 2.5.1 结晶前的准备 | 第36-37页 |
| 2.5.2 蛋白质结晶 | 第37-38页 |
| 2.6 免疫共沉淀Co-IP与蛋白质印迹WB | 第38-41页 |
| 2.6.1 免疫共沉淀Co-IP | 第38-39页 |
| 2.6.2 蛋白质印迹WB | 第39-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-71页 |
| 3.1 核受体NLS序列预测及核受体与IMPα片段截取 | 第41-43页 |
| 3.2 His标签蛋白沉淀实验检测核受体与IMPα相互作用 | 第43-46页 |
| 3.2.1 FXR、THR α1与IMPα相互作用的检测 | 第43-44页 |
| 3.2.2 ER α与IMPα相互作用的检测 | 第44-45页 |
| 3.2.3 His标签蛋白沉淀实验检测结果 | 第45-46页 |
| 3.3 Co-IP实验验证核受体与IMPα相互作用 | 第46-48页 |
| 3.3.1 细胞内验证ER α、THRα1与IMP α亚型的相互作用 | 第47-48页 |
| 3.3.2 Co-IP验证的结果 | 第48页 |
| 3.4 共表达纯化实验验证核受体与IMPα相互作用 | 第48-69页 |
| 3.4.1 核受体FXR与IMP α相互作用的验证 | 第48-52页 |
| 3.4.2 核受体ERα与IMP α相互作用的验证 | 第52-59页 |
| 3.4.3 核受体THRα与IMPα相互作用的验证 | 第59-68页 |
| 3.4.4 共表达纯化验证的结果 | 第68-69页 |
| 3.5 蛋白复合物的结晶 | 第69-71页 |
| 3.5.1 晶体的初步筛选 | 第69-71页 |
| 4 总结与讨论 | 第71-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
