| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 前言 | 第8-17页 |
| 1.1 细胞凋亡和细胞坏死 | 第8页 |
| 1.2 细胞凋亡与细胞坏死之间的联系 | 第8-9页 |
| 1.3 线粒体在细胞凋亡与细胞坏死中的作用 | 第9页 |
| 1.4 RIP3在细胞凋亡中的作用 | 第9-11页 |
| 1.5 RIP3与程序性坏死 | 第11-12页 |
| 1.6 RIP3中RHIM作用 | 第12页 |
| 1.7 RIP3在癌症中的潜在作用 | 第12-13页 |
| 1.8 RIP3在无菌炎症中的作用 | 第13页 |
| 1.9 绿豆胰蛋白酶抑制剂 | 第13-14页 |
| 1.10 激肽释放酶6与细胞凋亡 | 第14页 |
| 1.11 IGFBP3与细胞凋亡 | 第14-15页 |
| 1.12 本论文的研究内容及意义 | 第15-17页 |
| 1.12.1 研究意义 | 第15页 |
| 1.12.2 研究内容 | 第15-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-20页 |
| 2.1.1 菌株与细胞株 | 第17页 |
| 2.1.2 药品与试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.3 主要抗体 | 第18页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第18-19页 |
| 2.1.5 主要溶液配制 | 第19-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-33页 |
| 2.2.1 生物信息学分析RIP3蛋白结构 | 第20-21页 |
| 2.2.2 重组慢病毒包装载体pLV-EGFP-QCRIP3、pLV-EGFP-QNRIP3、pLV-EGFP-RIP3构建 | 第21-26页 |
| 2.2.3 病毒的包装及细胞的侵染 | 第26-28页 |
| 2.2.4 转录水平表达差异检测 | 第28页 |
| 2.2.5 蛋白免疫印迹 | 第28-30页 |
| 2.2.6 Caspase家族活化情况检测 | 第30-31页 |
| 2.2.7 重组绿豆LBBI蛋白的表达、纯化及活性测定 | 第31页 |
| 2.2.8 划痕实验 | 第31-33页 |
| 3 结果与讨论 | 第33-51页 |
| 3.1 RIP3的蛋白结构分析 | 第33-35页 |
| 3.2 重组pLV-EGFP-QCRIP3、pLV-EGFP-QNRIP3、pLV-EGFP-RIP3构建 | 第35-37页 |
| 3.2.1 目的基因的扩增结果 | 第35页 |
| 3.2.2 目的片段测序 | 第35-36页 |
| 3.2.3 目的片段连接与转化及鉴定 | 第36-37页 |
| 3.3 慢病毒的包装 | 第37-39页 |
| 3.3.1 三质粒系统包装病毒 | 第37-38页 |
| 3.3.2 慢病毒滴度测定 | 第38-39页 |
| 3.4 RIP3及突变体对MCF-7细胞生长的影响 | 第39-42页 |
| 3.4.1 MTT检测RIP3及突变体对MCF-7存活的影响 | 第39页 |
| 3.4.2 流式细胞检测RIP3及突变体对MCF-7凋亡的影响 | 第39-40页 |
| 3.4.3 显微检测RIP3及突变体对MCF-7形态学变化的影响 | 第40-42页 |
| 3.5 RIP3及其突变体诱导MCF-7细胞凋亡的机制 | 第42-43页 |
| 3.5.1 试剂盒检测RIP3及突变体对Caspase家族活化情况的影响 | 第42页 |
| 3.5.2 Western-Blot检测RIP3及突变体对Caspase3表达的影响 | 第42-43页 |
| 3.6 重组绿豆LBBI激活RIP3诱导细胞凋亡机制 | 第43-51页 |
| 3.6.1 重组绿豆LBBI的制备及活性测定 | 第43-45页 |
| 3.6.2 MTT法检测重组绿豆LBBI对MCF-7的影响 | 第45-46页 |
| 3.6.3 流式细胞仪检测重组绿豆LBBI对MCF-7凋亡的影响 | 第46页 |
| 3.6.4 重组绿豆LBBI对MCF-7细胞中KLK6、RIP3转录的影响 | 第46-47页 |
| 3.6.5 重组绿豆LBBI对KLK6、RIP3表达的影响 | 第47页 |
| 3.6.6 过表达RIP3对KLK6在MCF-7细胞转录和表达的影响 | 第47-48页 |
| 3.6.7 重组绿豆LBBI对IGFBP3细胞转录和表达的影响 | 第48-49页 |
| 3.6.8 过表达IGFBP3对RIP3表达的影响 | 第49页 |
| 3.6.9 重组绿豆LBBI对MCF-7肿瘤细胞迁移的影响 | 第49-51页 |
| 4 结论 | 第51-52页 |
| 5 展望 | 第52-53页 |
| 6 参考文献 | 第53-60页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第60-61页 |
| 8 致谢 | 第61页 |
