| 中文摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 英文缩略语 | 第10-16页 |
| 第1章 绪论 | 第16-34页 |
| 1.1 LOX-1的研究进展 | 第16-23页 |
| 1.1.1 LOX-1的基因结构 | 第16页 |
| 1.1.2 LOX-1的蛋白结构 | 第16-18页 |
| 1.1.3 LOX-1的生物功能 | 第18-20页 |
| 1.1.4 LOX-1是动脉硬化疾病的新型药物靶点 | 第20-21页 |
| 1.1.5 sLOX-1的研究进展 | 第21-23页 |
| 1.2 基因工程抗体 | 第23-28页 |
| 1.2.1 基因工程抗体概论 | 第23-24页 |
| 1.2.2 基因工程抗体与抗体人源化 | 第24-26页 |
| 1.2.3 单链抗体 | 第26-28页 |
| 1.3 噬菌体展示技术的研究进展 | 第28-32页 |
| 1.3.1 噬菌体抗体展示技术概论 | 第28-29页 |
| 1.3.2 噬菌体抗体展示原理 | 第29-30页 |
| 1.3.3 噬菌体抗体展示库的分类 | 第30-31页 |
| 1.3.4 噬菌体文库的生物淘筛 | 第31-32页 |
| 1.4 本论文的研究意义和内容 | 第32-34页 |
| 第2章 LOX-1 ECD的原核可溶性表达和纯化 | 第34-54页 |
| 2.1 引言 | 第34-35页 |
| 2.2 实验仪器和材料 | 第35-38页 |
| 2.2.1 主要仪器与设备 | 第35-36页 |
| 2.2.2 主要材料与试剂 | 第36-38页 |
| 2.3 方法 | 第38-44页 |
| 2.3.1 扩增人源LOX-1 ECD基因 | 第38页 |
| 2.3.2 PCR产物纯化 | 第38-39页 |
| 2.3.3 构建重组载体pENTR-LOX-1 ECD | 第39-40页 |
| 2.3.4 构建融合蛋白重组表达载体 | 第40-41页 |
| 2.3.5 表达宿主细胞的选择 | 第41-42页 |
| 2.3.6 蛋白可溶性表达情况的分析 | 第42页 |
| 2.3.7 优化融合蛋白MBP-LOX-1 ECD的可溶性表达条件 | 第42页 |
| 2.3.8 LOX-1蛋白的纯化 | 第42-43页 |
| 2.3.9 LOX-1 ECD蛋白浓度测定 | 第43页 |
| 2.3.10 LOX-1 ECD结合oxLDL活性的测定 | 第43-44页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第44-53页 |
| 2.4.1 重组融合蛋白表达载体的构建 | 第44页 |
| 2.4.2 融合蛋白在宿主细胞中的可溶性表达 | 第44-46页 |
| 2.4.3 标签蛋白对LOX-1 ECD可溶性表达的影响 | 第46-48页 |
| 2.4.4 MBP-LOX-1 ECD可溶性表达条件优化 | 第48-50页 |
| 2.4.5 LOX-1 ECD蛋白的纯化 | 第50-52页 |
| 2.4.6 LOX-1 ECD结合oxLDL活性测定结果 | 第52-53页 |
| 2.5 本章小结 | 第53-54页 |
| 第3章 人源SCFV噬菌体展示文库构建及抗LOX-1单链抗体的筛选 | 第54-83页 |
| 3.1 引言 | 第54页 |
| 3.2 材料和试剂 | 第54-58页 |
| 3.2.1 主要药品 | 第54-55页 |
| 3.2.2 培养基及溶液配制方法 | 第55页 |
| 3.2.3 建库引物 | 第55-57页 |
| 3.2.4 仪器设备 | 第57-58页 |
| 3.3 方法 | 第58-71页 |
| 3.3.1 人外周血PMBC的分离 | 第58页 |
| 3.3.2 总RNA的提取 | 第58页 |
| 3.3.3 cDNA的合成 | 第58-59页 |
| 3.3.4 scFv基因的拼接 | 第59-63页 |
| 3.3.5 pCANTAB5E载体及scFv片段的连接 | 第63-65页 |
| 3.3.6 连接产物电转化感受态细胞TG1 | 第65-66页 |
| 3.3.7 单链抗体噬菌体展示文库的鉴定 | 第66-67页 |
| 3.3.8 抗LOX-1 ECD scFv的淘筛 | 第67-70页 |
| 3.3.9 多克隆Phage ELISA | 第70-71页 |
| 3.3.10 单克隆Phage ELISA | 第71页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第71-82页 |
| 3.4.1 人PMBC总RNA的提取及cDNA合成 | 第71-72页 |
| 3.4.2 VH和VL基因的扩增 | 第72-73页 |
| 3.4.3 重叠延伸PCR扩增scFv | 第73-74页 |
| 3.4.4 pCANTAB5E-scFv载体制备 | 第74-76页 |
| 3.4.5 scFv抗体库的鉴定 | 第76-78页 |
| 3.4.6 文库的富集淘筛 | 第78-79页 |
| 3.4.7 单克隆Phage ELISA筛选 | 第79-82页 |
| 3.5 本章小结 | 第82-83页 |
| 第4章 单链抗体的分子鉴定、表达纯化和功能分析 | 第83-103页 |
| 4.1 引言 | 第83-84页 |
| 4.2 仪器与试剂 | 第84-86页 |
| 4.2.1 主要仪器与设备 | 第84-85页 |
| 4.2.2 主要试剂与材料 | 第85-86页 |
| 4.3 方法 | 第86-93页 |
| 4.3.1 阳性重组噬菌体质粒DNA的提取 | 第86页 |
| 4.3.2 单链抗体的生物信息学分析 | 第86页 |
| 4.3.3 scFv表达载体的构建 | 第86-89页 |
| 4.3.4 重组单链抗体表达菌株的构建 | 第89-91页 |
| 4.3.5 重组单链抗体的表达 | 第91页 |
| 4.3.6 重组单链抗体的纯化 | 第91-92页 |
| 4.3.7 蛋白浓度测定 | 第92页 |
| 4.3.8 western blot鉴定纯化的scFv | 第92页 |
| 4.3.9 scFv-39的活性测定 | 第92-93页 |
| 4.3.10 scFv-39的亲和力常数测定 | 第93页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第93-101页 |
| 4.4.1 scFv-39的序列分析 | 第93-94页 |
| 4.4.2 scFv-39的IMGT分析 | 第94-97页 |
| 4.4.3 scFv-39的ExPAsy分析 | 第97-99页 |
| 4.4.4 scFv的可溶性表达和纯化 | 第99-100页 |
| 4.4.5 scFv的亲和力测定 | 第100-101页 |
| 4.5 本章小结 | 第101-103页 |
| 第5章 总结与展望 | 第103-105页 |
| 5.1 总结 | 第103-104页 |
| 5.2 展望 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-120页 |
| 攻读博士期间的科研成果 | 第120-121页 |
| 致谢 | 第121页 |
