| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 前言 | 第11-18页 |
| 1.1 剂量补偿简介 | 第11-15页 |
| 1.1.1 雄性上调X染色体表达 | 第12-13页 |
| 1.1.2 雌性沉默一条X染色体表达 | 第13-14页 |
| 1.1.3 下调两条X染色体表达 | 第14-15页 |
| 1.2 剂量补偿其他模式的研究 | 第15-16页 |
| 1.3 msl-1 研究状况 | 第16-17页 |
| 1.4 本课题研究的内容、目的及意义 | 第17-18页 |
| 第二章 池蝶蚌msl-1 基因的cDNA克隆及分析 | 第18-35页 |
| 2.1 材料与操作 | 第18-23页 |
| 2.1.1 材料 | 第18页 |
| 2.1.2 性腺RNA的提取 | 第18-19页 |
| 2.1.3 RNA质量检测 | 第19页 |
| 2.1.4 SMART cDNA的合成 | 第19-20页 |
| 2.1.4.1 总RNA的DNase处理 | 第19页 |
| 2.1.4.2 SMART cDNA的合成 | 第19-20页 |
| 2.1.5 池蝶蚌msl-1 基因部分cDNA序列的获得 | 第20页 |
| 2.1.6 RACE-PCR获得msl-1 基因cDNA全长 | 第20-21页 |
| 2.1.7 PCR扩增产物的检测 | 第21页 |
| 2.1.8 目的片段的克隆 | 第21-22页 |
| 2.1.8.1 目的片段切胶回收 | 第21页 |
| 2.1.8.2 目的片段与pMD19-T载体连接 | 第21-22页 |
| 2.1.8.3 感受态细胞制备 | 第22页 |
| 2.1.8.4 连接产物的转化 | 第22页 |
| 2.1.8.5 菌液PCR验证 | 第22页 |
| 2.1.9 池蝶蚌msl-1 cDNA全长的拼接、分析 | 第22-23页 |
| 2.2 结果 | 第23-33页 |
| 2.2.1 RNA检测 | 第23页 |
| 2.2.2 池蝶蚌msl-1 cDNA全长的获得 | 第23-24页 |
| 2.2.2.1 部分序列的获得 | 第23-24页 |
| 2.2.2.2 SMART RACE扩增msl-1 cDNA全长 | 第24页 |
| 2.2.3 池蝶蚌msl-1 基因分析 | 第24-28页 |
| 2.2.4 池蝶蚌msl-1 氨基酸的序列特征 | 第28-30页 |
| 2.2.5 池蝶蚌msl-1 的功能域分析 | 第30页 |
| 2.2.6 蛋白质二级结构预测 | 第30-32页 |
| 2.2.7 msl-1 基因与其他物种的同源性分析 | 第32-33页 |
| 2.3 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 msl-1 基因在池蝶蚌不同组织中的表达 | 第35-42页 |
| 3.1 材料和操作 | 第35-37页 |
| 3.1.1 材料 | 第35页 |
| 3.1.2 msl-1 基因在各组织表达 | 第35-36页 |
| 3.1.2.1 各组织RNA提取 | 第35页 |
| 3.1.2.2 总RNA质量控制及DNase处理 | 第35页 |
| 3.1.2.3 cDNA的合成 | 第35-36页 |
| 3.1.2.4 Q-PCR引物设计 | 第36页 |
| 3.1.2.5 msl-1 基因的组织表达谱分析 | 第36页 |
| 3.1.3 msl-1 基因的不同年龄段性腺表达 | 第36-37页 |
| 3.1.3.1 性腺总RNA提取及质量控制 | 第36页 |
| 3.1.3.2 性腺总RNA处理 | 第36-37页 |
| 3.1.3.3 cDNA的合成 | 第37页 |
| 3.1.3.4 msl-1 基因在不同年龄池蝶蚌性腺表达谱分析 | 第37页 |
| 3.2 结果 | 第37-40页 |
| 3.2.1 池蝶蚌msl-1 基因各组织表达 | 第37-39页 |
| 3.2.2msl-1 基因在池蝶蚌性腺中不同年龄段的表达分析 | 第39-40页 |
| 3.3 讨论 | 第40-42页 |
| 第四章 池蝶蚌MSL-1 蛋白在性腺中的定位 | 第42-54页 |
| 4.1 材料与操作 | 第42-44页 |
| 4.1.1 pEASY载体构建 | 第42-43页 |
| 4.1.1.1 引物设计 | 第42页 |
| 4.1.1.2 扩增池蝶蚌msl-1 基因开放阅读框 | 第42页 |
| 4.1.1.3 构建载体 | 第42-43页 |
| 4.1.1.4 重组质粒的转化 | 第43页 |
| 4.1.1.5 菌液PCR筛选阳性克隆 | 第43页 |
| 4.1.2 重组质粒的原核表达 | 第43页 |
| 4.1.3 多克隆抗体的制备 | 第43页 |
| 4.1.4 ELISA测定多抗效价 | 第43-44页 |
| 4.1.5 WB检测多抗特异性 | 第44页 |
| 4.1.5.1 组织总蛋白的提取 | 第44页 |
| 4.1.5.2 Western blot | 第44页 |
| 4.1.6 MSL-1 蛋白在性腺中的细胞定位 | 第44页 |
| 4.2 结果 | 第44-53页 |
| 4.2.1 目的表达片段PCR扩增 | 第44-45页 |
| 4.2.2 阳性重组质粒的筛选 | 第45页 |
| 4.2.3 重组MSL-1 诱导表达 | 第45-46页 |
| 4.2.4 融合蛋白可溶性分析 | 第46-47页 |
| 4.2.5 蛋白的纯化 | 第47页 |
| 4.2.6 Bradford法测定蛋白浓度 | 第47-48页 |
| 4.2.7 多克隆抗体效价 | 第48-49页 |
| 4.2.8 抗体特异性分析 | 第49页 |
| 4.2.9 MSL-1 蛋白在性腺组织中的定位 | 第49-53页 |
| 4.3 讨论 | 第53-54页 |
| 第五章 结论与展望 | 第54-56页 |
| 5.1 结论 | 第54-55页 |
| 5.2 进一步的工作方向 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-67页 |
| 攻读硕士期间的研究成果 | 第67页 |
