| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略表 | 第8-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-22页 |
| 1 引言 | 第14-19页 |
| 1.1 酪氨酸激酶受体AXL的概述 | 第14-17页 |
| 1.2 TP53的概述 | 第17-19页 |
| 2 前期研究结果 | 第19页 |
| 3 实验目的与意义 | 第19-20页 |
| 4 实验内容及设计方案 | 第20-22页 |
| 4.1 本课题研究内容 | 第20-21页 |
| 4.2 技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 研究AXL对p53蛋白水平的调控 | 第22-37页 |
| 1 实验材料、试剂与仪器 | 第22-28页 |
| 1.1 材料与试剂 | 第22-23页 |
| 1.2 主要试剂配制 | 第23-28页 |
| 1.3 主要仪器 | 第28页 |
| 2 实验方法 | 第28-32页 |
| 2.1 质粒的扩增 | 第28-29页 |
| 2.1.1 TG1感受态细胞的制备 | 第28页 |
| 2.1.2 质粒的转化与扩增及菌种保存 | 第28-29页 |
| 2.2 细胞的复苏与传代 | 第29-30页 |
| 2.3 细胞分盘 | 第30页 |
| 2.4 慢病毒包装 | 第30页 |
| 2.5 慢病毒感染细胞 | 第30页 |
| 2.6 细胞蛋白样品的制备 | 第30-31页 |
| 2.7 制作蛋白浓度测定标准曲线 | 第31页 |
| 2.8 蛋白质印迹法检测蛋白表达 | 第31页 |
| 2.9 Co-IP实验 | 第31-32页 |
| 3 实验结果 | 第32-36页 |
| 3.1 质粒扩增鉴定 | 第32-33页 |
| 3.2 AXL调控p53蛋白水平的表达 | 第33-35页 |
| 3.3 AXL与p53之间不存在相互作用 | 第35-36页 |
| 4 讨论 | 第36-37页 |
| 第三章 探究AXL对TP53转录水平的调控机制 | 第37-55页 |
| 1 实验材料与试剂 | 第37-41页 |
| 1.1 材料与试剂 | 第37-38页 |
| 1.2 溶液配制 | 第38-41页 |
| 1.3 主要仪器 | 第41页 |
| 2 实验方法 | 第41-49页 |
| 2.1 qRT-PCR | 第41-43页 |
| 2.1.1 慢病毒感染细胞 | 第41页 |
| 2.1.2 RNA提取 | 第41-42页 |
| 2.1.3 合成cDNA | 第42-43页 |
| 2.1.4 Q-PCR | 第43页 |
| 2.2 组分分离鉴定 | 第43页 |
| 2.3 免疫荧光共定位 | 第43-44页 |
| 2.4 双荧光素酶活性测定 | 第44页 |
| 2.5 染色质免疫沉淀-PCR | 第44-49页 |
| 2.5.1 最佳酶解条件 | 第44-46页 |
| 2.5.1.1 细胞培养物交联和样品制备 | 第44-45页 |
| 2.5.1.2 细胞核处理和染色质剪切 | 第45-46页 |
| 2.5.2 染色质免疫沉淀 | 第46-49页 |
| 2.5.2.1 细胞培养物交联和样品制备 | 第46页 |
| 2.5.2.2 细胞核处理和染色质剪切 | 第46页 |
| 2.5.2.3 分析染色质的浓度和酶切情况 | 第46页 |
| 2.5.2.4 染色质免疫沉淀 | 第46-47页 |
| 2.5.2.5 染色质洗脱并解交联 | 第47页 |
| 2.5.2.6 DNA纯化 | 第47-48页 |
| 2.5.2.7 标准PCR | 第48-49页 |
| 3 实验结果 | 第49-53页 |
| 3.1 间皮瘤细胞中敲低AXL导致TP53转录水平上调 | 第49页 |
| 3.2 细胞组分分离鉴定AXL与p53存在细胞核共定位 | 第49-50页 |
| 3.3 免疫荧光鉴定AXL与p53存在细胞核共定位 | 第50-51页 |
| 3.4 双荧光素酶活性测定 | 第51-52页 |
| 3.5 染色质免疫沉淀-PCR(CHIP-PCR) | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| 第四章 分析AXL敲低或抑制激酶活性(R428)对肿瘤细胞(p53野生型或p53敲低)的影响 | 第55-61页 |
| 1 实验材料与试剂 | 第55页 |
| 1.1 材料与试剂 | 第55页 |
| 1.2 主要溶液的配制 | 第55页 |
| 1.3 实验仪器 | 第55页 |
| 2 实验方法 | 第55-57页 |
| 2.1 药物抑制伤口愈合实验 | 第55-56页 |
| 2.2 AXL敲低伤口愈合实验 | 第56页 |
| 2.3 药物抑制生长实验 | 第56页 |
| 2.4 敲低AXL细胞生长实验 | 第56-57页 |
| 3 实验结果 | 第57-59页 |
| 3.1 R428抑制AXL激酶活性后肿瘤细胞(p53野生型或p53敲低)伤口愈合变慢 | 第57页 |
| 3.2 敲低AXL后肿瘤细胞(p53野生型或p53敲低)伤口愈合变慢 | 第57-58页 |
| 3.3 R428抑制AXL激酶活性后肿瘤细胞(p53野生型或p53敲低)生长缓慢 | 第58-59页 |
| 3.4 敲低AXL后肿瘤细胞(p53野生型或p53敲低)生长缓慢 | 第59页 |
| 4 讨论 | 第59-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 硕士期间发表论文 | 第69页 |
| 硕士期间发表会议论文 | 第69页 |
| 待投稿论文 | 第69-70页 |
| 硕士期间获奖情况 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
