| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 第一部分 引言 | 第8-20页 |
| 一、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)研究进展 | 第8-18页 |
| (一) bFGF的基本性质 | 第8-9页 |
| (二) bFGF的生物学功能 | 第9-10页 |
| (三) bFGF的作用机制 | 第10-11页 |
| (四) bFGF与肿瘤 | 第11-14页 |
| (五) bFGF抗体的研制 | 第14-16页 |
| (六) bFGF的检测方法 | 第16-18页 |
| 二、本课题的研究内容及意义 | 第18-20页 |
| (一) 研究内容 | 第18页 |
| (二) 课题意义 | 第18-19页 |
| (三) 技术路线 | 第19-20页 |
| 第二部分 实验材料与方法 | 第20-41页 |
| 一、实验材料 | 第20-26页 |
| (一) 质粒、细菌菌株 | 第20-21页 |
| (二) 主要试剂 | 第21-22页 |
| (三) 重要试剂配制方法 | 第22-25页 |
| (四) 主要仪器 | 第25-26页 |
| (五) 实验动物 | 第26页 |
| (六) 人血清样品 | 第26页 |
| 二、实验方法 | 第26-41页 |
| (一) 重组人bFGF原核表达载体的构建 | 第26-31页 |
| (二) 重组人bFGF蛋白的表达 | 第31-34页 |
| (三) 重组人bFGF蛋白的纯化 | 第34-36页 |
| (四) 兔抗重组人bFGF多克隆抗血清的制备 | 第36-38页 |
| (五) 抗血清的纯化 | 第38-39页 |
| (六) 多克隆抗体的特异性检测 | 第39页 |
| (七) 双抗体夹心ELISA检测bFGF方法的建立 | 第39-40页 |
| (八) 双抗体夹心ELISA检测肿瘤患者血清中bFGF含量 | 第40-41页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第41-63页 |
| 一、重组人bFGF原核表达载体的构建 | 第41-43页 |
| 二、重组人bFGF蛋白表达与纯化 | 第43-50页 |
| (一) 重组人bFGF蛋白的表达 | 第43-44页 |
| (二) 最适表达条件的确定 | 第44-48页 |
| (三) 蛋白可溶性的确定 | 第48页 |
| (四) 蛋白的镍柱纯化 | 第48-49页 |
| (五) 蛋白的浓度测定 | 第49-50页 |
| 三、兔抗重组人bFGF多克隆抗体的制备与纯化 | 第50-57页 |
| (一) 免疫方案 | 第50页 |
| (二) 抗体效价测试 | 第50-55页 |
| (三) bFGF 抗血清的纯化 | 第55-56页 |
| (四) 抗血清的特异性鉴定 | 第56-57页 |
| 四、双抗体夹心检测bFGF含量方法的建立 | 第57-59页 |
| (一) 抗体最适工作浓度的确定 | 第57-58页 |
| (二) bFGF双抗夹心ELISA方法的基本参数 | 第58-59页 |
| 五、双抗体夹心ELISA检测肿瘤患者血清中bFGF含量 | 第59-63页 |
| (一) 标准曲线的绘制 | 第59页 |
| (二) 健康人和肿瘤患者血清bFGF含量检测 | 第59-63页 |
| 第四部分 讨 论 | 第63-67页 |
| (一) 重组人bFGF原核表达载体的构建与鉴定 | 第63-64页 |
| (二) 重组人bFGF蛋白的表达与纯化 | 第64-65页 |
| (三) 兔抗重组人bFGF多克隆抗体的制备与纯化 | 第65-66页 |
| (四) bFGF 双抗体夹心ELISA检测方法的建立及肿瘤患者血清检测 | 第66-67页 |
| 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 在研期间公开发表论文情况 | 第74页 |
| 在研期间参加科研项目情况 | 第74-75页 |
| 附录 | 第75页 |
