| 致谢 | 第10-11页 |
| 缩略表 | 第11-12页 |
| 摘要 | 第12-13页 |
| Abstract | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-23页 |
| 1.1 引言 | 第15页 |
| 1.2 参与磷吸收与转运的基因 | 第15-17页 |
| 1.2.1 植物磷转运体家族PHTs | 第15-16页 |
| 1.2.2 植物磷酸盐转运体转运协助因子PHF1 | 第16页 |
| 1.2.3 PHO1参与磷往地上部转运 | 第16-17页 |
| 1.3 参与磷吸收与转运基因的泛素化修饰 | 第17-19页 |
| 1.3.1 泛素E2结合酶PHO2 | 第17-19页 |
| 1.3.2 泛素E3连接酶NLA | 第19页 |
| 1.4 参与磷吸收与转运基因的磷酸化修饰 | 第19-21页 |
| 1.5 本研究目标和意义 | 第21-23页 |
| 第二章 蛋白激酶CK2调控OsPT8受外界磷浓度的调节 | 第23-38页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 材料 | 第23-24页 |
| 2.3 方法 | 第24-30页 |
| 2.3.1 溶液培养实验 | 第24页 |
| 2.3.2 PT8多克隆抗体的制备 | 第24页 |
| 2.3.3 植物质膜蛋白的提取 | 第24-26页 |
| 2.3.4 植物总膜蛋白的提取 | 第26-27页 |
| 2.3.5 体内磷酸化实验 | 第27-28页 |
| 2.3.6 体外Pull down互作分析 | 第28-30页 |
| 2.3.6.1 OsCK2 β 3-FLAG总膜蛋白和GST-OsCK2 α 3原核表达蛋白的诱导表达及纯化 | 第28-29页 |
| 2.3.6.2 Pull-down具体步骤 | 第29-30页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第30-38页 |
| 2.4.1 结果 | 第30-36页 |
| 2.4.1.1 PT8蛋白表达水平受缺磷诱导 | 第30-31页 |
| 2.4.1.2 OsCK2 α 3和β 3体内协同磷酸化PT8受外界磷浓度调节 | 第31-36页 |
| 2.4.2 讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 磷转运体OsPHT1;8模拟非磷酸化的功能分析 | 第38-53页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 材料 | 第38页 |
| 3.3 方法 | 第38-42页 |
| 3.3.1 模拟非磷酸化点突变载体的构建 | 第38-39页 |
| 3.3.2 抗砷突变体的筛选及表型分析 | 第39页 |
| 3.3.3 抗砷突变体的基因克隆 | 第39页 |
| 3.3.4 突变体转基因回复验证 | 第39-40页 |
| 3.3.5 转基因材料的Southern blot检测 | 第40-42页 |
| 3.3.5.1 植物基因组的提取 | 第40-41页 |
| 3.3.5.2 Southern Blot | 第41-42页 |
| 3.3.6 OsPHF1多克隆抗体的制备 | 第42页 |
| 3.3.7 水稻有效磷、总磷测定及干重测定 | 第42页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第42-53页 |
| 3.4.1 结果 | 第42-51页 |
| 3.4.1.1 PT8基因的克隆及突变体表型分析 | 第42-45页 |
| 3.4.1.2 模拟非磷酸化的PT8上膜程度和磷吸收能力增强 | 第45-51页 |
| 3.4.2 讨论 | 第51-53页 |
| 第四章 水稻蛋白激酶CK2与泛素E2结合酶PHO2互作分析 | 第53-68页 |
| 4.1 引言 | 第53页 |
| 4.2 材料 | 第53-54页 |
| 4.3 方法 | 第54-61页 |
| 4.3.1 OsCK2和OsPHO2膜酵母双杂 | 第54-56页 |
| 4.3.1.1 膜酵母双杂载体构建 | 第54-55页 |
| 4.3.1.2 酵母转化 | 第55-56页 |
| 4.3.2 烟草亚细胞定位实验 | 第56-57页 |
| 4.3.3 双分子荧光互补实验(BiFC,bimolecular fluorescence complementation) | 第57页 |
| 4.3.4 体外Pull down互作分析 | 第57-60页 |
| 4.3.4.1 His-OsPHO2原核表达蛋白的诱导表达及纯化 | 第58-60页 |
| 4.3.5 蛋白免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,co-IP)互作分析 | 第60-61页 |
| 4.3.6 体外磷酸化分析 | 第61页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第61-68页 |
| 4.4.1 结果 | 第61-67页 |
| 4.4.1.1 OsCK2与OsPHO2的互作分析 | 第61-66页 |
| 4.4.1.2 OsCK2与OsPHO2的调控关系研究 | 第66-67页 |
| 4.4.2 讨论 | 第67-68页 |
| 第五章 结论与展望 | 第68-71页 |
| 5.1 结论 | 第68-69页 |
| 5.2 展望 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-82页 |
| 附录 | 第82-85页 |
| 攻读博士学位期间发表的科研论文 | 第85页 |
