| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述：猪博卡病毒研究进展 | 第10-20页 |
| 1.1 细小病毒 | 第10页 |
| 1.2 猪博卡病毒的发现 | 第10-11页 |
| 1.3 猪博卡病毒的分类 | 第11-12页 |
| 1.4 猪博卡病毒流行病学调查 | 第12-13页 |
| 1.5 猪博卡病毒的分子特征 | 第13-14页 |
| 1.6 猪博卡病毒与疾病的相关性 | 第14-16页 |
| 1.6.1 疾病的症状及诊断 | 第14页 |
| 1.6.2 猪博卡病毒的感染特点 | 第14-15页 |
| 1.6.3 博卡病毒感染致病的分子机制 | 第15-16页 |
| 1.6.4 猪博卡病毒的培养与检测 | 第16页 |
| 1.7 猪博卡病毒检测方法 | 第16-18页 |
| 1.7.1 聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction, PCR） | 第16-17页 |
| 1.7.2 实时聚合酶链式反应（Real-time Polymerase Chain Reaction, RT-PCR） | 第17页 |
| 1.7.3 间接免疫荧光法 | 第17页 |
| 1.7.4 环介导等温核酸扩增技术(LAMP) | 第17-18页 |
| 1.8 防治措施 | 第18-19页 |
| 1.8.1 加强饲养管理 | 第18页 |
| 1.8.2 对症治疗 | 第18页 |
| 1.8.3 母猪返饲 | 第18-19页 |
| 1.9 研究的目的与意义 | 第19-20页 |
| 第二章 屠宰猪博卡病毒感染的分子流行病学调查 | 第20-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 样品采集 | 第20页 |
| 2.1.2 试验用溶液及主要试剂的配制 | 第20-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-23页 |
| 2.2.1 DNA 模板的提取 | 第22页 |
| 2.2.2 引物设计 | 第22页 |
| 2.2.3 PCR 反应体系 | 第22-23页 |
| 2.2.4 PCR 反应程序 | 第23页 |
| 2.2.5 扩增产物的检测及测序 | 第23页 |
| 2.2.6 序列比对和系统进化树分析 | 第23页 |
| 2.3 结果与分析 | 第23-29页 |
| 2.3.7 PBoV 检测结果统计分析 | 第23-25页 |
| 2.3.8 PBoV NS1 基因核苷酸序列及推导氨基酸序列的同源性分析 | 第25-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-31页 |
| 2.4.1 关于 PBoV 基因型的多样性 | 第29-30页 |
| 2.4.2 PBoV 感染及其公共卫生意义 | 第30页 |
| 2.4.3 PBoV 的致病性及流行病学 | 第30-31页 |
| 2.5 小结 | 第31-32页 |
| 第三章 猪博卡病毒 PBoV-HN2 株全基因组的克隆和分析 | 第32-45页 |
| 3.1 材料 | 第32-34页 |
| 3.1.1 病毒、菌株和载体 | 第32页 |
| 3.1.2 试验用溶液及主要试剂的配制 | 第32-34页 |
| 3.2 方法 | 第34-36页 |
| 3.2.1 DNA 提取 | 第34页 |
| 3.2.2 引物设计 | 第34页 |
| 3.2.3 PCR 扩增及病毒基因组的克隆 | 第34-35页 |
| 3.2.4 PCR 产物的克隆与序列测定 | 第35-36页 |
| 3.3 结果与分析 | 第36-42页 |
| 3.3.1 PBoV 全基因组的克隆 | 第36-37页 |
| 3.3.2 序列测定、拼接 | 第37页 |
| 3.3.3 PBoV 河南株基因组结构解析 | 第37-38页 |
| 3.3.4 PBoV-HN2 基因序列分析 | 第38-42页 |
| 3.4 讨论 | 第42-44页 |
| 3.4.1 猪博卡样病毒全基因组的测定 | 第42-43页 |
| 3.4.2 PBoV 基因组结构分析 | 第43页 |
| 3.4.3 PBoV 遗传进化分析 | 第43-44页 |
| 3.5 小结 | 第44-45页 |
| 第四章 猪博卡病毒 NP1 基因表达及其抗体检测 ELISA 方法的建立 | 第45-64页 |
| 4.1 材料 | 第45-47页 |
| 4.1.1 载体与菌株 | 第45页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第45-47页 |
| 4.2 方法 | 第47-54页 |
| 4.2.1 NP1 蛋白特性的生物信息学分析 | 第47页 |
| 4.2.2 引物的设计与合成 | 第47-48页 |
| 4.2.3 原核重组表达载体的构建 | 第48-50页 |
| 4.2.4 重组表达载体的鉴定 | 第50页 |
| 4.2.5 重组表达菌的诱导表达 | 第50-51页 |
| 4.2.6 重组蛋白的镍离子螯合层析纯化 | 第51-52页 |
| 4.2.7 Western-Blot | 第52页 |
| 4.2.8 ELISA 检测方法的初步建立 | 第52-54页 |
| 4.3 结果 | 第54-61页 |
| 4.3.1 PBoV NP1 蛋白及拟表达重组蛋白的特性分析 | 第54-55页 |
| 4.3.2 重组表达载体的鉴定 | 第55-57页 |
| 4.3.3 重组菌的诱导表达和纯化 | 第57-58页 |
| 4.3.4 重组蛋白的特异性鉴定 | 第58-59页 |
| 4.3.5 ELISA 检测方法的初步建立 | 第59-60页 |
| 4.3.6 天津地区猪场 PBoV 感染情况 | 第60-61页 |
| 4.4 讨论 | 第61-62页 |
| 4.4.1 NP1 蛋白生物信息学特征 | 第61页 |
| 4.4.2 非结构蛋白 NP1 的重组表达 | 第61-62页 |
| 4.4.3 PBoV 感染的 ELISA 检测方法的建立 | 第62页 |
| 4.5 小结 | 第62-64页 |
| 第五章 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-73页 |
| 附录1 缩略词表 | 第73-74页 |
| 附录2 主要仪器 | 第74-75页 |
| 附录3 主要生化试剂 | 第75-76页 |
| 附录4 PBoV-HN2 株全基因组解析 | 第76-80页 |
| 附录5 20 个 PBoV 部分 NS1 基因核苷酸序列（以来源省份拼音缩写命名） | 第80-88页 |
| 发表论文和科研情况说明 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
