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小麦多子房性状SSH文库的构建及其相关基因的克隆与表达

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-14页
第一章 文献综述第14-34页
   ·杂交小麦研究概况及存在的问题第14-18页
     ·国内外小麦杂种优势的研究历史第14-15页
     ·小麦杂种优势利用的途径与研究进展第15-18页
     ·杂种小麦研究存在的问题第18页
   ·多子房现象的发现及研究进展第18-23页
     ·多子房小麦的发现与选育第18-19页
     ·多子房小麦的花器官发育第19页
     ·多子房小麦的生化研究第19-20页
     ·多子房小麦的遗传分析第20-21页
     ·多子房小麦的分子标记第21页
     ·多子房小麦的应用价值第21页
     ·其他作物花器官突变现象研究进展第21-23页
   ·抑制消减杂交(SSH)技术及其在植物上的应用第23-28页
     ·SSH 技术原理和操作流程第23-25页
     ·SSH 技术评价第25-26页
     ·SSH 技术在植物中的应用第26-28页
   ·生物信息学在基因研究中的应用第28-30页
     ·序列比对和功能预测第28-29页
     ·基因的电子克隆第29-30页
   ·基因功能验证的主要方法第30-31页
     ·定量PCR 技术第30页
     ·基因体外表达技术第30-31页
     ·反义技术(Antisense technique)第31页
     ·RNA 干扰技术(RNA interference,RNAi)第31页
   ·研究目的意义及技术路线第31-34页
     ·研究的目的意义第31-32页
     ·研究的技术路线第32-34页
第二章 近等基因系多子房性状的评价与新变异类型的发现第34-41页
   ·材料与方法第34-36页
     ·材料第34-36页
     ·外显率(Penetrance)第36页
     ·多粒结实率(Maturing rate)第36页
     ·发芽率(Percentage germination)第36页
   ·结果与分析第36-39页
     ·小麦多子房新变异类型的发现第36-38页
     ·多子房株系外显率的表现第38页
     ·多子房株系多粒种子结实率的调查第38-39页
     ·小麦多子房NIL 发芽率的测定第39页
   ·讨论第39-41页
第三章 小麦多子房性状相关SSH 文库的构建及质量检测第41-54页
   ·材料第41页
   ·方法第41-49页
     ·小麦幼穗总RNA 提取第41-42页
     ·总RNA 的DNase I 处理第42页
     ·总RNA 浓度、纯度及完整性检测第42页
     ·mRNA 分离纯化及检测第42-43页
     ·SSH 过程第43-46页
     ·连接转化第46-47页
     ·阳性克隆检测第47-48页
     ·质粒提取及酶切第48-49页
   ·结果与分析第49-52页
     ·小麦幼穗总RNA 质量检测第49页
     ·mRNA 质量检测第49页
     ·cDNA 合成及酶切效果检测第49-50页
     ·SSH 文库的评价第50-51页
     ·蓝白斑筛选结果第51页
     ·阳性克隆筛选结果第51页
     ·部分阳性克隆的质粒提取及酶切结果第51-52页
   ·讨论第52-54页
第四章 多子房性状相关ESTs 的生物信息学分析与半定量RT-PCR 验证第54-73页
   ·材料与方法第54-57页
     ·材料第54页
     ·相关cDNA 文库的构建和阳性克隆的获得第54页
     ·序列测定和生物信息学分析第54-55页
     ·半定量RT-PCR 分析第55-57页
   ·结果与分析第57-70页
     ·序列测定及分析第57页
     ·Mu 文库中EST 的比对分析和功能分类第57页
     ·Mo 文库中EST 的比对分析和功能分类第57-64页
     ·两个文库中未知功能EST 序列BLASTn 分析第64-67页
     ·两库比较分析第67-68页
     ·多ⅡNIL 幼穗及其它组织RNA 和cDNA 一链检测第68-69页
     ·部分基因的时空表达分析第69-70页
   ·讨论第70-73页
第五章 多子房小麦RPS15a 和RPL21 基因的克隆与分析第73-87页
   ·材料与方法第73-77页
     ·供试材料第73页
     ·RNA 的提取纯化及cDNA 一链的合成第73-74页
     ·DNA 的提取及痕量RNA 去除第74页
     ·电子克隆第74页
     ·RT-PCR 扩增和基因组PCR第74-75页
     ·目的片段的回收第75-76页
     ·基因克隆与测序第76-77页
     ·序列分析第77页
     ·时空表达分析第77页
   ·结果与分析第77-85页
     ·小麦RPS15a 基因的克隆与分析第77-80页
     ·小麦RPL21 基因的克隆与分析第80-85页
   ·讨论第85-87页
第六章 小麦多子房性状相关基因Cab 的克隆与表达分析第87-98页
   ·材料与方法第87-90页
     ·材料第87页
     ·RNA 的提取纯化及cDNA 一链的合成第87页
     ·电子克隆第87页
     ·RT-PCR 扩增第87-88页
     ·目的片段的回收、克隆与测序第88页
     ·序列分析第88页
     ·表达分析第88-90页
   ·结果与分析第90-96页
     ·Cab 基因的cDNA 序列分析第90-91页
     ·Cab 基因的氨基酸序列分析第91-96页
     ·Cab 基因的表达分析第96页
   ·讨论第96-98页
第七章 结论第98-101页
   ·本研究结论第98-100页
   ·本研究创新点第100-101页
参考文献第101-112页
致谢第112-113页
作者简介第113页

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