| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-16页 |
| 1.1 苹果树腐烂病研究概况 | 第9-11页 |
| 1.1.1 苹果树腐烂病的发生发展 | 第9页 |
| 1.1.2 苹果树腐烂病的田间症状 | 第9页 |
| 1.1.3 苹果树腐烂病的病原学研究 | 第9-10页 |
| 1.1.4 苹果树腐烂病菌的潜伏侵染及致病机理研究 | 第10-11页 |
| 1.2 果胶酶的研究进展 | 第11页 |
| 1.2.1 果胶酶研究现状 | 第11页 |
| 1.2.2 果胶酶分类 | 第11页 |
| 1.2.3 真菌果胶酶与致病性的关系 | 第11页 |
| 1.3 多聚半乳糖醛酸酶的研究进展 | 第11-14页 |
| 1.3.1 多聚半乳糖醛酸酶的研究背景 | 第11-12页 |
| 1.3.2 多聚半乳糖醛酸酶的分类与特征 | 第12页 |
| 1.3.3 PG 基因及其特征 | 第12-13页 |
| 1.3.4 真菌 PG 基因的表达调控 | 第13页 |
| 1.3.5 多聚半乳糖醛酸酶的致病性 | 第13页 |
| 1.3.6 内切多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白 | 第13-14页 |
| 1.4 基因敲除研究进展 | 第14-15页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第15-16页 |
| 第二章 内切多聚半乳糖醛酸酶基因敲除盒的构建 | 第16-25页 |
| 2.1 材料、试剂和仪器 | 第16-17页 |
| 2.2 方法 | 第17-23页 |
| 2.2.1 黑腐皮壳菌基因组 DNA 的提取——CTAB 法 | 第17-18页 |
| 2.2.2 JM109 菌株超级感受态的制备 | 第18-19页 |
| 2.2.3 质粒连接 | 第19页 |
| 2.2.4 质粒的热激转化 | 第19页 |
| 2.2.5 pCB1003 质粒的提取 | 第19-20页 |
| 2.2.6 黑腐皮壳菌内切多聚半乳糖醛酸酶基因的引物设计 | 第20-21页 |
| 2.2.7 Double joint PCR 方法构建内切多聚半乳糖基因敲除盒 | 第21-23页 |
| 2.3 结果与分析 | 第23-24页 |
| 2.3.1 内切多聚半乳糖醛酸酶基因敲除盒的构建 | 第23-24页 |
| 2.4 讨论 | 第24-25页 |
| 第三章 PEG 介导的基因敲除和转化子的鉴定 | 第25-35页 |
| 3.1 材料、试剂和仪器 | 第25-27页 |
| 3.1.1 材料 | 第25页 |
| 3.1.2 试剂 | 第25-27页 |
| 3.1.3 仪器 | 第27页 |
| 3.2 试验方法 | 第27-32页 |
| 3.2.1 酶解液的配制 | 第27页 |
| 3.2.2 黑腐皮壳菌原生质体的制备和转化 | 第27-29页 |
| 3.2.3 内切多聚半乳糖醛酸酶基因敲除突变体的筛选和鉴定 | 第29-32页 |
| 3.3 实验结果 | 第32-34页 |
| 3.3.1 转化子的 PCR 验证 | 第32-33页 |
| 3.3.2 Southern blot 验证 | 第33-34页 |
| 3.4 讨论 | 第34-35页 |
| 第四章 Vmpg-4 敲除突变体的表型观察和致病力测定 | 第35-40页 |
| 4.1 材料、试剂和仪器 | 第35页 |
| 4.1.1 材料 | 第35页 |
| 4.1.2 试剂 | 第35页 |
| 4.1.3 仪器 | 第35页 |
| 4.2 试验方法 | 第35-36页 |
| 4.2.1 菌落形态观察及生长速度测定 | 第35页 |
| 4.2.2 产生分生孢子器的时间和数量测定 | 第35-36页 |
| 4.2.3 △Vmpg-4 致病性测定 | 第36页 |
| 4.3 结果与分析 | 第36-38页 |
| 4.3.1 △Vmpg-4 表型观察 | 第36-37页 |
| 4.3.2 △Vmpg-4 敲除突变体的致病力测定 | 第37-38页 |
| 4.4 讨论 | 第38-40页 |
| 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 作者简介 | 第45页 |
