中文摘要 | 第10-12页 |
ABSTRACT | 第12-13页 |
1 前言 | 第14-26页 |
1.1 小麦赤霉病 | 第14-16页 |
1.1.1 小麦赤霉病的危害 | 第14-15页 |
1.1.2 小麦赤霉病抗病类型 | 第15页 |
1.1.3 小麦赤霉病抗病机制研究进展 | 第15-16页 |
1.1.3.1 植物信号路径与小麦赤霉病抗性 | 第15-16页 |
1.1.3.2 小麦赤霉病的抗性分子机制 | 第16页 |
1.2 水杨酸介导的抗病信号路径研究进展 | 第16-22页 |
1.2.1 水杨酸与植物抗病性 | 第17-19页 |
1.2.1.1 植物的一般免疫特性 | 第17-18页 |
1.2.1.2 水杨酸的生物合成 | 第18页 |
1.2.1.3 水杨酸是植物抗病反应中的重要信号分子 | 第18-19页 |
1.2.2 水杨酸介导的信号路径 | 第19-21页 |
1.2.2.1 水杨酸与SAR信号转导 | 第19-20页 |
1.2.2.2 水杨酸介导的的上游信号 | 第20页 |
1.2.2.3 水杨酸介导的的下游信号 | 第20-21页 |
1.2.3 NPR1及其同源基因 | 第21-22页 |
1.3 病毒诱导的基因沉默技术研究进展 | 第22-24页 |
1.3.1 VIGS技术原理 | 第22页 |
1.3.2 VIGS技术的优缺点 | 第22-23页 |
1.3.3 大麦条纹花叶病毒诱导的基因沉默技术的研究进展 | 第23-24页 |
1.3.3.1 大麦条纹花叶病毒简介 | 第23页 |
1.3.3.2 大麦条纹花叶病毒诱导的基因沉默技术的应用 | 第23-24页 |
1.4 短柄草在小麦功能基因研究上的应用 | 第24-25页 |
1.5 本研究的目的和意义 | 第25-26页 |
2 材料与方法 | 第26-40页 |
2.1 材料 | 第26-29页 |
2.1.1 植物材料 | 第26页 |
2.1.2 菌株与质粒 | 第26页 |
2.1.3 酶及生化试剂 | 第26页 |
2.1.4 试验地点 | 第26页 |
2.1.5 PCR引物 | 第26-28页 |
2.1.6 主要溶液和培养基配制 | 第28-29页 |
2.1.7 主要仪器 | 第29页 |
2.2 方法 | 第29-40页 |
2.2.1 植物组织总RNA提取 | 第29-30页 |
2.2.2 第一链CDNA的合成及PCR反应 | 第30-31页 |
2.2.3 目的DNA片段的纯化回收 | 第31页 |
2.2.4 回收产物与T载体连接 | 第31-32页 |
2.2.5 普通质粒小量提取 | 第32-33页 |
2.2.6 热激法转化E.COLI感受态细胞 | 第33页 |
2.2.7 农杆菌感受态的制备 | 第33页 |
2.2.8 冻融法转化农杆菌感受态细胞 | 第33-34页 |
2.2.9 生物信息学分析 | 第34页 |
2.2.10 BSMV-VIGS的应用 | 第34-36页 |
2.2.10.1 BSMV基因沉默载体的构建 | 第34页 |
2.2.10.2 BSMV-VIGS技术诱导小麦基因沉默的程序 | 第34-36页 |
2.2.11 QRT-PCR分析基因表达 | 第36页 |
2.2.12 病原菌培养、接种和抗病性鉴定 | 第36-37页 |
2.2.12.1 离体叶片赤霉病接种方法及抗病性鉴定 | 第36页 |
2.2.12.2 小麦穗部赤霉病接种方法及抗病性鉴定 | 第36-37页 |
2.2.12.3 短柄草胚芽鞘的赤霉病接种方法及抗病性鉴定 | 第37页 |
2.2.13 台盼蓝染色检测小麦叶片腐生斑 | 第37页 |
2.2.14 TAICS短柄草遗传转化 | 第37-40页 |
2.2.14.1 TAICS短柄草遗传转化载体构建 | 第37页 |
2.2.14.2 短柄草愈伤组织的诱导 | 第37-38页 |
2.2.14.3 农杆菌转化短柄草愈伤组织 | 第38页 |
2.2.14.4 愈伤的筛选与再分化 | 第38-40页 |
3 结果与分析 | 第40-54页 |
3.1 利用TAPDS基因探索BSMV-VIGS体系在小麦上的应用 | 第40-44页 |
3.1.1 利用BSMV对小麦苗期PDS基因沉默的研究 | 第40-41页 |
3.1.2 利用BSMV-VIGS研究小麦穗部PDS基因沉默 | 第41-42页 |
3.1.3 BSMV-VIGS技术在小麦近缘属中的应用 | 第42-44页 |
3.2 利用VIGS研究相关基因的赤霉病抗性 | 第44-49页 |
3.2.1 禾谷镰刀菌菌株的选择 | 第44-45页 |
3.2.2 利用VIGS技术鉴定SA信号路径相关基因的小麦赤霉病抗性 | 第45-48页 |
3.2.2.1 小麦苗期鉴定SA信号路径相关基因的赤霉病抗性 | 第45-46页 |
3.2.2.2 小麦成株期鉴定SA信号路径相关基因的赤霉病抗性 | 第46-48页 |
3.2.3 TAICS基因的短柄草遗传转化与赤霉病抗性鉴定 | 第48-49页 |
3.2.3.1 TAICS基因的短柄草遗传转化 | 第48页 |
3.2.3.2 转基因短柄草的赤霉病抗性鉴定 | 第48-49页 |
3.3 SA处理对赤霉病扩展的影响 | 第49-51页 |
3.3.1 叶部SA处理对赤霉病扩展的影响 | 第49-50页 |
3.3.2 穗部SA处理对赤霉病扩展的影响 | 第50-51页 |
3.4 SA信号路径关键基因的表达分析 | 第51-53页 |
3.4.1 SA信号路径基因在禾谷镰刀菌诱导下的表达分析 | 第51-52页 |
3.4.2 外源SA处理后的基因表达分析 | 第52-53页 |
3.5 小麦与白粉病互作过程中TAICS基因的作用 | 第53-54页 |
4 讨论 | 第54-57页 |
4.1 BSMV-VIGS体系的建立及其在赤霉病抗性相关基因研究上的应用 | 第54页 |
4.2 SA对小麦赤霉病抗性的影响 | 第54-55页 |
4.3 SA信号转导路径相关基因对赤霉病抗性的影响 | 第55-57页 |
5 结论 | 第57-59页 |
参考文献 | 第59-68页 |
致谢 | 第68-69页 |
攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第69页 |