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人支气管上皮细胞GCLC基因调控区AP-2元件的研究

摘要第3-5页
Abstract第5-6页
中英文对照词汇表第9-11页
前言第11-15页
第一部分 人GCLC基因转录调控区域(-790~-766)的AP-2元件和NF-κB元件的实验研究第15-28页
    材料和方法第15-22页
        1. 实验材料第15-17页
            1.1 细胞株及细胞培养液第15页
            1.2 主要试剂第15-16页
            1.3 主要仪器设备第16页
            1.4 主要溶液的配制第16-17页
                1.4.1 细胞培养液第16页
                1.4.2 细胞裂解液第16页
                1.4.3 5×TBE储备液第16-17页
                1.4.4 马来酸缓冲液第17页
                1.4.5 20×SSC第17页
                1.4.6 Washing缓冲液第17页
                1.4.7 Detection缓冲液第17页
                1.4.8 10×封闭液(blocking solution)第17页
                1.4.9 抗体溶液(antibody solution)第17页
        2. 实验方法第17-22页
            2.1 16HBE(人支气管上皮)细胞系的复苏及培养第17-19页
                2.1.1 细胞的复苏第17-18页
                2.1.2 细胞的传代第18页
                2.1.3 细胞的冻存第18-19页
            2.2 电泳迁移率变动分析(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA)第19-22页
                2.2.1 EMSA的基本原理第19页
                2.2.2 16HBE细胞核蛋白的提取(所有步骤都在冰上进行)第19-20页
                2.2.3 探针的合成、退火、反应体系的构建第20-21页
                2.2.4 电泳第21页
                2.2.5 电转膜第21-22页
                2.2.6 发光检测:先准备工作液(现配现用)12第22页
    结果第22-25页
    讨论第25-28页
第二部分 人GCLC基因转录调控区域(-784~-770)的AP-2元件突变载体的功能分析第28-40页
    材料和方法第28-36页
        1. 主要材料第28-30页
            1.1 质粒和菌株第28页
            1.2 细胞株及细胞培养液第28页
            1.3 主要试剂第28-29页
            1.4 主要仪器设备第29页
            1.5 主要溶液的配制第29-30页
                1.5.1 LB培养液第29页
                1.5.2 LB固体培养基第29-30页
        2. 实验方法第30-36页
            2.1 人GCLC基因上游(-784~-770)调控序列突变AP-2荧光素酶报告载体的构建第30-34页
                2.1.1 引物设计第30页
                2.1.2 两轮PCR扩增并构建突变AP-2报告载体第30-34页
            2.2 转染与荧光素酶活性分析第34-35页
                2.2.1 16HBE细胞培养同第一部分第34页
                2.2.2 双报道质粒瞬时共转染16HBE细胞第34-35页
                2.2.3 荧光素酶活性检测第35页
            2.3 数据分析及统计学处理第35-36页
    结果第36-38页
    讨论第38-40页
结论第40-41页
致谢第41-42页
参考文献第42-47页
攻读学位期间的研究成果第47-48页
综述第48-54页
    参考文献第52-54页

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