摘要 | 第3-5页 |
Abstract | 第5-6页 |
中英文对照词汇表 | 第9-11页 |
前言 | 第11-15页 |
第一部分 人GCLC基因转录调控区域(-790~-766)的AP-2元件和NF-κB元件的实验研究 | 第15-28页 |
材料和方法 | 第15-22页 |
1. 实验材料 | 第15-17页 |
1.1 细胞株及细胞培养液 | 第15页 |
1.2 主要试剂 | 第15-16页 |
1.3 主要仪器设备 | 第16页 |
1.4 主要溶液的配制 | 第16-17页 |
1.4.1 细胞培养液 | 第16页 |
1.4.2 细胞裂解液 | 第16页 |
1.4.3 5×TBE储备液 | 第16-17页 |
1.4.4 马来酸缓冲液 | 第17页 |
1.4.5 20×SSC | 第17页 |
1.4.6 Washing缓冲液 | 第17页 |
1.4.7 Detection缓冲液 | 第17页 |
1.4.8 10×封闭液(blocking solution) | 第17页 |
1.4.9 抗体溶液(antibody solution) | 第17页 |
2. 实验方法 | 第17-22页 |
2.1 16HBE(人支气管上皮)细胞系的复苏及培养 | 第17-19页 |
2.1.1 细胞的复苏 | 第17-18页 |
2.1.2 细胞的传代 | 第18页 |
2.1.3 细胞的冻存 | 第18-19页 |
2.2 电泳迁移率变动分析(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA) | 第19-22页 |
2.2.1 EMSA的基本原理 | 第19页 |
2.2.2 16HBE细胞核蛋白的提取(所有步骤都在冰上进行) | 第19-20页 |
2.2.3 探针的合成、退火、反应体系的构建 | 第20-21页 |
2.2.4 电泳 | 第21页 |
2.2.5 电转膜 | 第21-22页 |
2.2.6 发光检测:先准备工作液(现配现用)12 | 第22页 |
结果 | 第22-25页 |
讨论 | 第25-28页 |
第二部分 人GCLC基因转录调控区域(-784~-770)的AP-2元件突变载体的功能分析 | 第28-40页 |
材料和方法 | 第28-36页 |
1. 主要材料 | 第28-30页 |
1.1 质粒和菌株 | 第28页 |
1.2 细胞株及细胞培养液 | 第28页 |
1.3 主要试剂 | 第28-29页 |
1.4 主要仪器设备 | 第29页 |
1.5 主要溶液的配制 | 第29-30页 |
1.5.1 LB培养液 | 第29页 |
1.5.2 LB固体培养基 | 第29-30页 |
2. 实验方法 | 第30-36页 |
2.1 人GCLC基因上游(-784~-770)调控序列突变AP-2荧光素酶报告载体的构建 | 第30-34页 |
2.1.1 引物设计 | 第30页 |
2.1.2 两轮PCR扩增并构建突变AP-2报告载体 | 第30-34页 |
2.2 转染与荧光素酶活性分析 | 第34-35页 |
2.2.1 16HBE细胞培养同第一部分 | 第34页 |
2.2.2 双报道质粒瞬时共转染16HBE细胞 | 第34-35页 |
2.2.3 荧光素酶活性检测 | 第35页 |
2.3 数据分析及统计学处理 | 第35-36页 |
结果 | 第36-38页 |
讨论 | 第38-40页 |
结论 | 第40-41页 |
致谢 | 第41-42页 |
参考文献 | 第42-47页 |
攻读学位期间的研究成果 | 第47-48页 |
综述 | 第48-54页 |
参考文献 | 第52-54页 |