| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第8-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-19页 |
| 1.1 植物耐盐基因的研究概况和发展趋势 | 第12-15页 |
| 1.1.1 渗透调节相关基因 | 第13页 |
| 1.1.2 抗氧化胁迫相关基因 | 第13页 |
| 1.1.3 信号转导相关基因 | 第13-14页 |
| 1.1.4 编码抗胁迫转录因子的基因 | 第14-15页 |
| 1.2 WRKY转录因子的研究 | 第15-16页 |
| 1.2.1 WRKY转录因子概述 | 第15页 |
| 1.2.2 WRKY转录因子在植物非生物胁迫中的作用 | 第15-16页 |
| 1.3 转录组测序技术的研究 | 第16-18页 |
| 1.3.1 转录组测序技术概述 | 第16-17页 |
| 1.3.2 新一代转录组测序技术的应用 | 第17页 |
| 1.3.3 转录组测序技术在植物盐胁迫响应基因筛选中的应用 | 第17-18页 |
| 1.4 研究内容及日的意义 | 第18页 |
| 1.5 技术路线 | 第18-19页 |
| 2 菊花转录组测序 | 第19-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 植物材料与预处理 | 第19页 |
| 2.1.2 实验设备仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-23页 |
| 2.2.1 菊花总RNA的提取与检测 | 第20-21页 |
| 2.2.2 cDNA文库的制备与上机测序 | 第21页 |
| 2.2.3 序列组装 | 第21页 |
| 2.2.4 基因功能注释 | 第21页 |
| 2.2.5 差异基因分析 | 第21页 |
| 2.2.6 Quantitative Real-time PCR (qPCR)验证 | 第21-23页 |
| 2.3 结果与分析 | 第23-27页 |
| 2.3.1 转录组序列组装及分析 | 第23-24页 |
| 2.3.2 转录本的功能注释 | 第24-26页 |
| 2.3.3 与菊花盐胁迫响应有关的差异表达基因 | 第26-27页 |
| 2.3.4 qPCR验证结果分析 | 第27页 |
| 3 WRKY2基因的克隆和对菊花的遗传转化 | 第27-43页 |
| 3.1 实验材料 | 第27-28页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第27-28页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第28页 |
| 3.1.3 实验主要试剂和菌株 | 第28页 |
| 3.1.4 引物序列 | 第28页 |
| 3.2 实验方法 | 第28-35页 |
| 3.2.1 菊花总RNA的提取与检测 | 第28-29页 |
| 3.2.2 cDNA的合成和gDNA去除 | 第29页 |
| 3.2.3 引物设计与PCR扩增 | 第29-30页 |
| 3.2.4 PCR产物的检测与胶回收 | 第30页 |
| 3.2.5 PCR回收产物的连接转化 | 第30-31页 |
| 3.2.6 基因序列分析 | 第31页 |
| 3.2.7 菊花DgWRKY2基因表达载体的构建 | 第31-32页 |
| 3.2.8 农杆菌感受态的制备 | 第32-33页 |
| 3.2.9 重组质粒转化农杆菌感受态细胞 | 第33页 |
| 3.2.10 农杆菌介导法转化菊花 | 第33-34页 |
| 3.2.11 转基因阳性植株的鉴定 | 第34-35页 |
| 3.2.12 转基因植株的表达 | 第35页 |
| 3.3 结果与分析 | 第35-43页 |
| 3.3.1 DgWRKY2全长的获得 | 第35-36页 |
| 3.3.2 DgWRKY2基因的序列分析 | 第36-38页 |
| 3.3.3 DgWRKY2蛋白的生物信息学分析 | 第38-40页 |
| 3.3.4 DgWRKY2蛋白的同源性分析及系统进化发育树分析 | 第40-42页 |
| 3.3.5 转基因植株的获得及表达水平 | 第42-43页 |
| 3.3.6 DgWRKY2过表达菊花植株的表型观察 | 第43页 |
| 4 DgWRKY2基因的耐盐性评价 | 第43-57页 |
| 4.1 实验材料 | 第44页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第44页 |
| 4.1.2 实验设备仪器 | 第44页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第44页 |
| 4.2 实验方法 | 第44-47页 |
| 4.2.1 盐胁迫处理 | 第44-45页 |
| 4.2.2 盐胁迫下转基因菊花的生理指标测定 | 第45页 |
| 4.2.3 氮蓝四唑(NBT)和二氨基联苯胺(DAB)染色 | 第45页 |
| 4.2.4 DgWRKY2相关耐盐调控基因在盐胁迫处理下的表达分析 | 第45-47页 |
| 4.2.5 数据处理与分析 | 第47页 |
| 4.3 结果与分析 | 第47-57页 |
| 4.3.1 盐胁迫下菊花幼苗生理生化特性的变化 | 第47-54页 |
| 4.3.2 DgWRKY2相关耐盐调控基因在盐胁迫处理下的表达分析 | 第54-57页 |
| 5 讨论 | 第57-62页 |
| 5.1 盐胁迫下菊花转录组信息分析 | 第57-59页 |
| 5.1.1 盐胁迫下菊花差异表达基因的筛选与分析 | 第57-58页 |
| 5.1.2 调节菊花耐盐性的转录因子 | 第58-59页 |
| 5.2 DgWRKY2的获得与生物信息学分析 | 第59-60页 |
| 5.3 转DgWRKY2基因菊花耐盐机理探讨 | 第60-61页 |
| 5.4 DgWRKY2基因在盐胁迫应答过程中参与的信号转导通路 | 第61-62页 |
| 6 结论 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第72页 |
