| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 符号说明 | 第8-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-22页 |
| 1.引言 | 第13-22页 |
| 1.1 稻瘟病研究现状 | 第13-16页 |
| 1.1.1 稻瘟病菌侵染机制 | 第13-14页 |
| 1.1.2 植物与病原菌免疫互作 | 第14-15页 |
| 1.1.3 水稻与稻瘟病菌免疫互作 | 第15-16页 |
| 1.2 植物免疫反应 | 第16-17页 |
| 1.2.1 病原菌相关分子模式激发的免疫反应(PTI) | 第16页 |
| 1.2.2 效应因子激发的免疫反应(ETI) | 第16-17页 |
| 1.3 microRNA研究进展 | 第17-20页 |
| 1.3.1 microRNA生物合成及功能 | 第17-19页 |
| 1.3.2 microRNA参与调控抗性反应 | 第19页 |
| 1.3.3 microRNA参与调控稻瘟病抗性 | 第19-20页 |
| 1.4 广谱抗病蛋白RPW8.1研究进展 | 第20-21页 |
| 1.5 研究意义 | 第21-22页 |
| 第二部分 实验研究 | 第22-68页 |
| 第一章 水稻过表达材料的获得 | 第22-36页 |
| 1.1 材料 | 第22-24页 |
| 1.1.1 水稻材料 | 第22页 |
| 1.1.2 构建克隆载体及菌株 | 第22页 |
| 1.1.3 试验所需试剂 | 第22-23页 |
| 1.1.5 试验用培养基及抗生素 | 第23-24页 |
| 1.2 方法 | 第24-34页 |
| 1.2.1 miR444b.2克隆构建 | 第24-27页 |
| 1.2.2 靶基因Os02g49840克隆构建 | 第27-28页 |
| 1.2.3 MIM444b.2克隆构建 | 第28-29页 |
| 1.2.4 农杆菌介导的水稻愈伤组织遗传转化 | 第29-30页 |
| 1.2.5 水稻阳性转化子转基因苗鉴定 | 第30-31页 |
| 1.2.6 转基因株系相关基因检测 | 第31-34页 |
| 1.2.7 引物设计软件 | 第34页 |
| 1.3 结果与分析 | 第34-35页 |
| 1.3.1 水稻转基因株系的获得 | 第34-35页 |
| 1.3.2 转基因水稻株系纯合材料鉴定 | 第35页 |
| 1.4 讨论 | 第35页 |
| 1.5 小结 | 第35-36页 |
| 第二章 miR444b.2负调控稻瘟病和纹枯病抗性及水稻分蘖 | 第36-56页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第36-38页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第36页 |
| 2.1.2 稻瘟菌 | 第36页 |
| 2.1.3 试验所需试剂及仪器 | 第36页 |
| 2.1.4 试验所需培养基 | 第36-38页 |
| 2.2 试验方法 | 第38-42页 |
| 2.2.1 水稻苗培养 | 第38页 |
| 2.2.2 稻瘟菌培养 | 第38-39页 |
| 2.2.3 水稻活体接种稻瘟病菌 | 第39-40页 |
| 2.2.4 发病表型鉴定 | 第40页 |
| 2.2.5 水稻叶片组织DAB染色 | 第40-41页 |
| 2.2.6 分析网站及软件 | 第41-42页 |
| 2.3 结果与分析 | 第42-53页 |
| 2.3.1 水稻材料中microRNA的筛选 | 第42页 |
| 2.3.2 接种稻瘟病菌处理LTH和IRBLkm-Ts后miR444b.2及其靶基因在水稻中的差异表达模式 | 第42-45页 |
| 2.3.3 过表达miR444b.2导致水稻更加感病 | 第45-46页 |
| 2.3.4 miR444b.2抑制防御相关基因表达 | 第46-47页 |
| 2.3.5 过表达miR444b.2抑制PTI响应 | 第47-48页 |
| 2.3.6 过表达miR444b.2导致水稻更感纹枯病 | 第48-49页 |
| 2.3.7 过表达miR444b.2抑制MADS盒基因的表达并导致分蘖减少 | 第49-51页 |
| 2.3.8 OsMADS57(Os02g49840)定位在细胞核内 | 第51页 |
| 2.3.9 MIM444b.2材料及Os02g49840过表达材料靶基因检测分析 | 第51-53页 |
| 2.4 讨论 | 第53-55页 |
| 2.5 小结 | 第55-56页 |
| 第三章 RPW8.1正调控稻瘟病抗性及农艺性状 | 第56-68页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第56-57页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第56页 |
| 3.1.2 稻瘟病菌菌株 | 第56页 |
| 3.1.3 试验所需试剂及仪器 | 第56-57页 |
| 3.2 试验方法 | 第57-59页 |
| 3.2.1 水稻苗培养(同2.2.1) | 第57页 |
| 3.2.2 稻瘟病菌培养(同2.22) | 第57页 |
| 3.2.3 水稻活体接种稻瘟病菌(同2.2.3) | 第57页 |
| 3.2.4 发病表型鉴定(同2.2.4) | 第57页 |
| 3.2.5 PAMP分子(flg22/chitin)诱导防御相关基因表达 | 第57页 |
| 3.2.6 RPW8.1转基因水稻农艺性状检测 | 第57-58页 |
| 3.2.7 使用软件 | 第58-59页 |
| 3.3 结果与分析 | 第59-66页 |
| 3.3.1 异源表达RPW8.1增强水稻对稻瘟病抗性 | 第59-60页 |
| 3.3.2 异源表达RPW8.1增强防御相关基因表达 | 第60-61页 |
| 3.3.3 RPW8.1响应PAMP分子(flg22/chitin)诱导早期防御相关基因累积 | 第61-62页 |
| 3.3.4 RPW8.1被诱导子诱导累积 | 第62-63页 |
| 3.3.5 RPW8.1影响水稻农艺性状 | 第63-66页 |
| 3.4 讨论 | 第66-67页 |
| 3.5 小结 | 第67-68页 |
| 第三部分 总结与展望 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 附录1 本研究所使用引物汇总 | 第78-81页 |
| 附录2 本研究使用载体pCAMBIA1300图谱 | 第81-82页 |
| 附录3 miR444b.2构建克隆序列 | 第82-83页 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第83页 |
